粮油检验 油料油脂中黄曲霉毒素B1的测定 荧光定量快速检测法.docxVIP

2

粮油检验油料油脂中黄曲霉毒素B1的测定

荧光定量快速检测法

1范围

本文件规定了黄曲霉毒素B1的荧光定量快速检测方法的原理、试剂、仪器设备及材料、样品制备、样品测定、结果判定和检测限。

本文件适用于花生仁、玉米胚等油料及其油脂和饼粕中黄曲霉毒素B1的快速检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T5491粮食、油料检验扦样、分样法

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3原理

采用荧光侧向免疫层析方法学原理，将待测样品滴加在加样区，样品中的黄曲霉毒素B1与结合垫中的荧光微球标记黄曲霉毒素B1抗体结合并通过毛细作用向前层析，达到检测区后，检测线T线上固定的黄曲霉毒素B1抗原与剩余未结合的荧光微球标记黄曲霉毒素B1抗体结合。检测线T线上结合的荧光微球标记黄曲霉毒素B1抗体的量与样品中黄曲霉毒素B1的浓度成反比。层析结束后，采用荧光定量快速检测仪读取T线和C线的荧光强度并计算T/C值，通过仪器内置的标准曲线即可计算出样品中黄曲霉毒素B1的含量并判断阴阳性。

4试剂

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，实验室用水应符合GB/T6682中三级水。

4.1样本稀释液(1)。

4.2甲醇。

（1）样本稀释液是由上海飞测生物技术有限公司研制。提供该信息是为了方便本标准用户的使用，而不是对该试剂的认可。可获得相同结果的其它试剂均可使用。

5仪器设备及材料

实验室常规仪器、设备及材料。

3

5.1粉碎机：可使试样粉碎后全部通过20目标准筛。

5.2天平：分度值0.01g。

5.3漩涡振荡器。

5.4黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测卡(2)：具体储存条件参照使用说明。

5.5离心机。

5.6恒温孵育器：孵育温度37℃,工作条件：环境温度5-37℃,环境湿度不大于80%。

5.7荧光定量快速检测仪（3）：工作条件：环境温度5-40℃,环境湿度不大于90%。

5.8ID卡。

5.9条形码。

6样品制备

6.1扦样与分样

按GB/T5491执行。

6.2样品前处理

6.2.1花生仁、玉米胚或及饼粕等。取有代表性的样品300g~500g，用粉碎机粉碎至样本90%通过20

目标准筛，对粉碎后的样品再次混匀后备用。

6.2.2花生油、玉米油等油脂。取有代表性毛油20g以上，4000r/min离心2min，取上层液体备用（除

毛油以外的植物油直接称取，不用离心）。

6.2.3准确称取5.0±0.05g粉碎后的样品（或离心后的上层液体）于50mL离心管中，按料液比1:5

加入25mL甲醇水溶液（V甲醇:V水为8:2），震荡提取5min。

6.2.4提取结束后，4000rpm离心2min（或静置3~5min后过滤），得上清液。

6.2.5取100ul上清液，加入到600ul样品稀释液中（4.1），混匀备用。

注1：不同厂家荧光定量快速检测卡的样品处理方法可能不同，应按照使用说明规定的方法进行操作。

注2：待测样品吸水量过大不易提取时，可采用1:10比例提取，检测结果乘以2即为样品中黄曲霉毒素B1的含量。

（2）黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测卡是由上海飞测生物科技有限公司研制。提供该信息是为了方便本标准企业的使用，而不是对上海飞测荧光定量快速检测卡检测的认可，任何具有相同技术参数和性能的产品均可使用。

（3）荧光定量快速检测仪是适合的商品测量仪器，此条信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的指定认可。

7样品测定

4

7.1检测前准备

7.1.1将待用黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测卡、样品提取液、样品稀释液恢复至室温。

7.1.2将检测卡恒温孵育器开机，待温度升至37℃后即可使用。

7.1.3将荧光定量快速检测仪开机，预热10min，插入本批次产品所对应的ID卡（每批次产品只需插一次即可），如需切换检测项目，扫描相应项目和批次的条形码即可。

7.2样品检测

7.2.1从包装袋中取出黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测卡，水平置于检测卡恒温孵育器上。

7.2.2用移液枪吸取稀释后的待测液100ul加到检测卡上的加样孔中，开始计时孵育8min。

7.2.3孵育结束后，将检测卡插入荧光定量快速检测仪中，按读数键或触摸屏幕读数即可。

8结果判定

8.1定量检测