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1.检验目的与原理
1.1检验目的
规范丙型肝炎病毒核心抗原检测试验，确保检测结果准确性和重复性。可用于临床辅助
诊断是否感染丙型肝炎病毒。
1.2检验原理
应用ELISA法原理检测人血清或血浆中的丙型肝炎病毒游离核心抗原，用2株丙型肝
炎病毒核心抗原的单克隆抗体包被酶标板，另2株丙型肝炎病毒核心抗原的单克隆抗体标记
辣根过氧化物酶，加入TMB显色液后显色，用来检测血清或血浆中的丙型肝炎病毒游离核
心抗原。
1.3分析参数
样品量100μL
试剂量100μL
方法ELISA
反应时间90分钟
反应温度37℃
2.样本收集和贮存
2.1原始样本系统
血清（包括SST管）和血浆（EDTA-K2、肝素锂、肝素钠、枸橼酸钠、ACD、CPDA-1、
CP2D、CPD、草酸钾），尿液（晨尿、随时尿、24小时尿等）或其它体液（羊水等）使用
玻璃管或塑料管分离样本，无黄疸、无溶血、无脂血，已分离出的样本应立即分析。
2.2试管及填充物类型
血清样本需用标准试管或有分离胶的真空管，收集3ml血液。待血液凝固后3500rpm
离心5分钟，分离血清。
2.3保存条件及时间
2.3.1接收标本后在置1-2h后将标本离心分离出血清或血浆，避免溶血。离心必须达到
3000rpm15min，离心后的血清中不能含有颗粒物和微量纤维蛋白。
2.3.2标本保存时间：室温（15-25℃）下可稳定48h，普通冰箱中（2-8℃）稳定5d，在-20℃
最多可保存4周。避免反复冻融。不可使用热灭活的标本。
2.3.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4-8℃冰箱内保存7d。
3.试剂
3.1试剂成分
丙型肝炎病毒核心抗原检测试剂盒（酶联免疫法），湖南康润药业有限公司，国药准字
3401179。
试剂盒组分：1.抗HCV-cAg单克隆抗体包被酶标板；
2.抗HCV-cAg酶标记抗体工作液；
3.HCV-cAg阳性对照；
4.HCV-cAg阴性对照；
5.浓缩洗涤液；
6.TMB显色液A；
7.TMB显色液B；
8.终止液；
9.附件：自封袋、封板模和产品说明书。
3.2试剂准备
试验前提前将所需的试剂盒从贮藏冰箱领出，室温平衡30分钟。
3.3试剂贮藏要求（StorageInstruction）
未打开的试剂盒保存于2-8℃，效期12个月。不可冻存。
4.仪器
TECAN酶免工作站。
5.校准
见TECAN酶免工作站SOP。
6.操作步骤
6.1配液：浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。
6.2加样：将微孔条固定于支架，按序编号。每次检测均需设置阴性对照、阳
性对照和空白对照各2孔。空白对照孔直接加入样品稀释液200微升，其
余每孔加样品稀释液100微升，分别在相应孔加入待测样品、阴性对照和
阳性对照各100ul。
6.3温育：充分混匀，封板，置37°C孵育60分钟。
6.4洗板：小心揭掉封板模，用洗涤液洗涤5遍，最后一次尽量扣干。
6.5加酶：每孔加入酶结合物200ul。
6.7温育：充分混匀，加上封板膜，置37℃温育30分钟。
6.8洗涤：小心揭掉封板模，用洗涤液洗涤5遍，最后一次尽量扣干。
6.9显色：每孔加入显色剂A、B各50l，轻轻振荡混匀，37℃避光显色10
分钟。
6.10测定：每孔加终止液50l，轻轻振
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