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HBV微环DNA重组质粒的构建及初步药效学实验
饶桂荣;张换敬;黄彬;陈光明;王洪敏;杨富强
【摘要】ObjectiveTodevelopatherapeuticminicircleDNAplasmidof
HBVandinvestigatetheirimmuneactivityinvitroandinvivo.Methods
Twogeneswereamplified,whichseparatelyencodedHBVmiddle
envelopeprotein(preS2.S)asavaccineandhumaninterleukin(IL)-
2/interferon(IFN)γfusionproteinasanadjuvantbyPCRfromplasmids
pcNDA3.1/preS2.SandpcDNA3.1/hIL-2-IFNγ.Thentwogeneswerecloned
intoeukaryoticvectorZY781andtheparentplasmidpreS2.S/ZY781and
hIL-2-IFNγ/ZY781wereobtainedrespectively.Thenewplasmidswere
analyzedbyrestrictionendonucleaseandDNAsequencing.Theparent
plasmidswereinducedtoproduceminicirclepMCS2.SandpMCIIFby
arabinose.TheminicircleplasmidsweretransfectedintoCOS-7cellsin
vitrowithLipofectamineTM2000.At24,48and72haftertransfection,the
supernatantswerequantifiedbyELISA.Thetwominicircleplasmidswere
injectedintoBALB/cmicebyelectroporationinsitutogether.Whenthe
micewerekilled4weekslater,specifichumoralandcellularimmune
responseswereexamined.ResultsThegenesegmentsandinserting
directionofpMCS2.SandpMCIIFwerecorrectbygeneticanalysis.At48h
aftertransfection,theconcentrationofHBsAg,IL-2andIFNγwere60.3±7.8
ng/ml,17.7±1.9ng/mland10.3±0.9ng/ml,respectively,whichwerethe
peakvalues.ProtectiveantibodiesofHBsAbwereproduced,andco-
injectionofminicirclepMCS2.StogetherwithadjuvantpMCIIFresultedin
moreevidentimmuneresponses.Therewasstronglyspecifichumoraland
cellimmunitybyonly5μgplasmidpermice.ConclusionsTheminicircle
pMCS2.SandpMCIIFareconstructedsuccessfully,andin-ducestrongly
specificimmuneactivityinvitroandinvivo.%目的构建HBV的治疗性微环质
粒并进行体内外实验研究.方法采用聚合酶链式反应扩增HBV包膜蛋白preS2.S
抗原基因和hIL-2-IFNγ融合基因,将2个基因分别克隆于ZY781载体,得到亲本质
粒preS2.S/ZY781和hIL-2-IFNγ/ZY781,测序正确后,用阿拉伯糖诱导生成微环质
粒pMCS2
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