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大肠杆菌DPS表达、体外自组装及抗氧化作用研究
刘文;贾义华;方丽;刘长爱;陈浩;路凯敏;胡巍
【摘要】DNA-bindingproteinfromstarvedcells(DPS)isakeyprotective
proteinsinbacterialgrowthunderstressenvironment.DPSwasexpressed
inprokaryoticcellsandpurifiedsoastostudyitsself-assemblyactivityin
vitro.Thedpsgenewasamplifiedbypolymerasechainreactionwith
specificprimersthatwasinsertedbyhistagat3endandthetemplate
wasgenomefromEscherichiacolistrain0111.Afterdigestedtogether
withEcoRIandBamHIrestrictenzymes,thedpsandpBV220werelinkedin
ordertoconstructpBVDPSHisexpressionvector.DPSexpressedinE.coli
bytemperatureinductionwaspurifiedwithaffinitychromatography
columnanditsself-assemblyinvitrowastestedwithnaturalPAGEonthe
basisofproteinmolecularweight.DPSprotectionforDNAfromoxidation
wasdetectedwith1.2%agaroseelectrophoresis.Theresultsshowedthata
specificfragmentwith522bplengthwasacquiredandpBVDPSHisvector
wasconstructedcorrectlyusingenzymedigestionandsequencingtests.
TheDPSwith19.5kDrelativemolecularweightonSDSwas
identifiedwithWesternblotting,thepurifiedDPScouldself-assemblyin
vitrointopolymerswithmuchlargermolecularweightthan19.5kDin
pH7.5PBSsolutionandDPSprotectionDNAresistancetohydroxylradicals
oxidationcouldbedemonstratedinFentonreactionsystem.Itwas
concludedthatE.coliDPSexpressedgeneticallyinprokaryoticcellscould
correctlyself-assemblytofunctionalmulti-polymersandhadaabilityof
protectionDNAfromROSoxidantdamageinvitro.%DNA结合蛋白（DNA-
bindingproteinsfromstarvedcells，DPS）是细菌一类重要的抗逆境保护蛋白。
对大肠杆菌DPS蛋白进行原核表达和纯化旨为研究其体外自组装和抗氧化活性。
构建表达载体pBVDPSHis，诱导表达并纯化DPS单体蛋白，通过非变性PAGE
检测DPS单体自组装情况，通过质粒在Fenton反应时的降解情况检测DPS对
DNA的抗氧化保护作用。结果表明，PCR扩增得到522bp的特异性基因片段，
成功构建表达载体pBVDPSHis，诱导表达了分子量为19.5kD的DPS单体蛋白，
亲和层析法纯化的单体DPS经非变性PAGE电泳证实以多聚体蛋白形式存在，
Fenton反应说明DPS具有保护质粒D
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