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一、USP方法
5.2.12抗IIa活性（20.0~35.0IU/mg）
5.2.12.1仪器：紫外可见分光光度计、低温循环槽、电子天平
5.2.12.2试液：
醋酸溶液：取冰乙酸42ml于100ml容量瓶中，加水稀释
至刻度，混匀。
pH7.4聚乙二醇6000缓冲液：称取三羟甲基氨基甲烷
6.08g和氯化钠8.77g于1000ml容量瓶中，加水500ml溶解
后，加聚乙二醇60001.0g，用盐酸调节pH至7.4，加水稀释
至刻度。
pH7.4缓冲溶液：称取三羟甲基氨基甲烷6.08g和氯化钠
8.77g于1000ml容量瓶中，加水500ml溶解后，用盐酸调节
pH至7.4，加水稀释至刻度。
pH8.4缓冲溶液：称取三羟甲基氨基甲烷3.03g、氯化钠
5.12g和乙二胺四乙酸二钠1.40g于500ml容量瓶中，加水
250ml溶解后，用盐酸调节pH至8.4，加水稀释至刻度。
抗凝血酶III溶液：取1支抗凝血酶III，加水溶解成
5Units/ml。用pH7.4聚乙二醇6000缓冲液稀释成0.5Unit/ml。
人凝血酶溶液：用水将人凝血酶复溶，用pH7.4聚乙二
醇6000缓冲液稀释成5Units/ml。
显色底物：选择适合凝血酶的阿米酚试验的显色底物，用
水稀释成浓度约3mmol/L。临用前用pH8.4缓冲溶液稀释至
0.5mmol/L。
标准溶液：用pH7.4缓冲溶液将USP依诺肝素钠活性标
准品稀释为浓度0.015~0.070USPIU/ml之间的四个浓度梯度。
样品溶液：用pH7.4缓冲溶液将依诺肝素钠样品稀释为
与标准溶液浓度一致的浓度梯度。
5.2.11.3检测过程：取18支检测管，B、B为空白；T、T、T、
12123
T为样品溶液，各双份平行；S、S、S、S为标准溶液，
41234
各双份平行。按B、S、S、S、S、T、T、T、T、T、
1123412341
T、T、T、S、S、S、S、B的顺序，每管中加入抗凝
23412342
血酶III的体积为V（20~50μl），和同样体积的pH7.4缓冲溶
液（空白）、标准溶液或样品溶液；混合，但不要产生气泡。
于37℃温浴1分钟。向每管中加入2V人凝血酶溶液（40~100
μl），温浴1分钟。再加入5V显色底物（100~250μl），4分
钟后加入5V的醋酸溶液（100~250μl）终止反应。以B为
1
空白，用紫外可见分光光度计在405nm处测量光吸收。空白
B的吸收值相比B不得超过±0.05。
21
5.2.12.4计算
对每个浓度系列，将光吸收回归，与样品溶液和标准溶液
的浓度对数值作线性分析。然后以量平行线分析统计方法计算
每mL中依诺肝素钠抗IIa因子IU活性。4个浓度溶液的计算
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