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吡非尼酮抑制肿瘤相关成纤维细胞促进结肠癌细胞系HT29

上皮间质转化的作用及机制

马博昭;王小东;王金淼;戚峰

【摘要】目的:探讨吡非尼酮在肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)诱导的HT29结肠癌细

胞系侵袭、迁移、增殖、上皮-间质转化(EMT)中的作用及机制.方法:利用共培养小

室将CAFs与HT29共培养后CCK-8测定HT29增殖效率;Realtime-PCR和

Westernblot检测HT29结肠癌细胞系E-cadherin和Vimentin转录及蛋白表达

水平;Transwell实验检测HT29结肠癌细胞的迁移和侵袭能力.ELISA技术检测

CAFs细胞上清液中细胞因子的表达.结果:吡非尼酮抑制CAFs对HT29增殖促进作

用(P＜0.05);CAFs条件培养基培养HT29后,Vimentin表达水平显著升高(P＜

0.05),E-cadherin显著降低(P＜0.05);吡非尼酮处理CAFs的条件培养基对HT29

细胞中两种蛋白无明显影响;Transwell实验表明CAFs与HT29共培养后,其侵袭

和迁移能力明显增强(P＜0.05);ELISA结果提示CAFs分泌TGF-β1功能受吡非尼

酮抑制且存在剂量关系.结论:吡非尼酮通过抑制CAFs分泌TGF-β1抑制CAFs诱

导HT29结肠癌细胞系侵袭、迁移、增殖、上皮-间质转化.

【期刊名称】《天津医科大学学报》

【年(卷),期】2018(024)005

【总页数】6页(P399-403,408)

【关键词】肿瘤相关成纤维细胞;吡非尼酮;上皮间质转化;结肠癌

【作者】马博昭;王小东;王金淼;戚峰

【作者单位】天津医科大学总医院普通外科,天津300052;天津医科大学总医院普

通外科,天津300052;天津医科大学总医院普通外科,天津300052;天津医科大学总

医院普通外科,天津300052

【正文语种】中文

【中图分类】R735.3+5

近年来肿瘤微环境在肿瘤发生发展中的关键作用被越来越多的人认识，肿瘤微环境

由多种细胞成分构成，包括肿瘤相关成纤维细胞（cancer-associatedfibroblasts，

CAFs）、免疫细胞、内皮细胞及间充质细胞。在这种异质性环境中，CAFs是最主

要的细胞，在肿瘤进展、侵袭及迁移过程中起着重要的作用[1]。有些研究认为

CAFs在大多数的肿瘤中通过分泌多种细胞因子如TGF-β、IL-6等从而起到促进肿

瘤发生发展的作用[2-3]。吡非尼酮（PFD）是一个有效的抗纤维化药物，很多研

究已经证实，吡非尼酮可以改变成纤维细胞分泌的多种细胞因子及生长因子[4-7]。

本研究旨在探讨吡非尼酮在结肠癌CAFs诱导的HT29结肠癌细胞系侵袭、增殖、

上皮-间质转化（EMT）中的作用及机制，为结肠癌的治疗提供新的思路。

1材料与方法

1.1实验材料

1.1.1材料人结肠癌源性肿瘤相关成纤维细胞系（江苏齐氏生物公司），人结肠癌

细胞系HT29（本实验室保存）。

1.1.2主要试剂CCK-8试剂盒（日本同仁化学研究所），吡非尼酮（adamas-

beta公司），2×RTMasterMix及总RNA提取试剂盒（天根生物科技（北京）

有限公司）；高容量cDNA反转录试剂盒和SYBRSelectMasterMix

（Invitrogen公司，美国）；E-cadherin、Vimentin、β-actin单克隆抗体和辣

根过氧化物酶标记山羊抗兔抗体（CellSignalingTechnologY，美国）；

Westernblot发光液（Millipore公司，美国），TGF-β1、IL-6细胞因子ELISA

试剂盒（北京达科为生物技术有限公司）。

1.2研究方法

1.2.1筛选药物浓度结肠癌细胞系HT29以5×103个/孔接种于96孔板，吡非尼

酮以0、0.25、0.5mg/mL不同浓度分别培养HT29细胞，每组10个复孔，培养

72h，加入10μLCCK8溶液，37℃孵育1h，450nm处检测吸光度。

1.2.2细胞培养在以下几种条件下培养结肠癌细胞系HT29：含10%FBS的