原创力文档- 1、本文档共2页，可阅读全部内容。
- 2、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 6、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
人B7h基因原核表达载体的构建和表达的开题报告
1.研究背景和意义
基因表达载体是生物技术领域中重要的工具，可以用于基因转染、基因治疗和基因编
辑等研究方向。B7-H家族成员是一类共刺激分子，在肿瘤免疫疗法和移植免疫方面有
重要作用。当前，研究B7-H分子的功能和调控机制已成为免疫治疗领域的热点问题之
一。在此背景下，构建一个高效的原核表达载体是必要的。
2.研究内容和方法
（1）选择适合的重组质粒载体。在构建原核表达载体时，选择适合的质粒非常重要。
根据目的和实验条件，选择pET系列、pGEX系列或者pMAL系列等重组质粒，同时
还要考虑表达宿主菌株和打靶蛋白的产量等因素。
（2）选取适合的宿主菌株。在原核表达中，一般选择大肠杆菌作为宿主菌株，因为其
易于培养和大量生产。在菌株选取中，还要注意质粒的拷贝数、菌株生长速度和表达
产物的稳定性。
（3）扩增目的基因。获取目的基因需要进行PCR扩增。在PCR反应中，应根据目的
基因的大小、GC含量等因素，合理设置反应体系，同时需要对PCR产物进行分离纯化。
（4）将目的基因克隆到载体中。构建目的载体需要进行双酶切和连接，通过T4DNA
连接酶、限制酶和琼脂糖凝胶电泳等技术进行原核表达载体的构建。
（5）转染表达宿主菌株。将构建好的重组质粒转染大肠杆菌中，并通过平板筛选、
PCR等方法鉴定获得含有目的基因的表达宿主菌株。
（6）表达和纯化目的蛋白。在菌株表达达到最优条件时，通过感光性吸附树脂、金属
离子亲和树脂、凝胶过滤等不同的分离纯化方法获得目的蛋白。
3.预期结果
通过以上研究内容和方法，预期可以成功构建出一个高效的原核表达载体，实现目的
基因在大肠杆菌中的表达。同时，可以获得表达产物，通过不同的纯化方法获得目的
蛋白，为后续的功能研究提供基础支持。
4.参考文献
1.HuangR,etal.B7-H3andB7-H4expressioninnon-small-celllungcancer.Lung
cancer,2009.
2.HuangR,etal.B7-H4overexpressionpotentiatesimmuneevasionofcancercells.
Cancerbiomedicine,2014.
3.Kretz-RommelA,etal.B7-H3andB7-H4expressioninglioblastomas:correlation
withtumorproliferationandpatientsurvival.ClinicalCancerResearch,2004.
文档评论（0）