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人胱抑素C的原核表达及活性鉴定
李原;刘如石;蒋琰;李桑;郑姣;何赛;吴意
【摘要】目的：建立胱抑素C蛋白（CysC）原核表达系统，表达、纯化并鉴定
重组的人CysC。方法在不改变氨基酸序列的前提下，对CysC的编码基因进行
大肠杆菌同义密码子偏好性优化后，人工合成其序列，PCR扩增CysC基因，在
原核系统中表达重组人CysC。纯化表达的CysC重组蛋白，采用间接ELISA法
测定其反应灵敏度及免疫原性。结果十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-
PAGE）鉴定可知，重组基因在大肠杆菌中获得了有效表达，相对分子质量约为
35×103，Westernblot结果进一步说明重组蛋白为CysC蛋白，间接ELISA结
果显示，在包被浓度为0．5mg／L时便产生了阳性值。结论成功建立了CysC
原核表达系统，CysC蛋白作为抗原具有良好的免疫反应性与免疫原性，为制备相
应的抗原诊断单克隆抗体打下了基础，同时也为开发CysC快速诊断ELISA试剂
盒提供了可选原料。%ObjectiveToestablishaprokaryoticexpression
systemofcystatinC(CysC)proteinforexpress-ing,purifyingand
identifyingrecombinanthumanCysCprotein.MethodsUnderthepremise
ofunchangingaminoacidsequence,theCysCcodinggenewas
performedtheEscherichia(E.)colisynonymcodonbiasoptimizationand
itssequencewasartificiallysynthesized.TheCysCgenewasamplifiedby
PCR.ThehumanrecombinantCysCpro-teinwasexpressedinthe
prokaryoticsystem.TheexpressedCysCrecombinantproteinwas
purified.Itsreactionsen-sitivityandimmunogenicitywereassayedby
indirectELISA.ResultsTheSDSidentificationindicatedthere-
combinantgenegainedtheeffectiveexpressioninE.coli,themolecular
weightofrecombinantCysCproteinwas35×103.TheWesternblot
resultsfurtherrevealedthattherecombinantproteinwasCysC
protein,theindirectELISAresultsdisplayedthatwhenthecoating
concentrationwas0.5mg/L,thepositivevaluewouldbe
produced.ConclusionThepro-karyoticexpressionsystemissuccessfully
established,CysCproteinasantigenhasbetterimmunoreactivityandim-
munogenicity,whichlaysafoundationforpreparingcorresponding
antigendiagnosticmonoclonalantibody,meanwhilealsoprovidesthe
optionalrawmaterialfordevelopingCysCrapiddiagnosisELISAreagent
kit.
【期刊名称】《检验医学与临床》
【年(卷),期】2016(013)006
【总页数】4页(P730-733)
【关键词】人胱抑素C;酶联免疫吸附试验;免疫反应性;免疫原性
【作者】李原;刘如石;蒋琰;李桑;郑姣;
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