第十一章 细胞增殖及其调控课件.ppt

细胞生物学CellBiology;Pleasebequiet,上课了！！;Cellreproductionregulation;Summary:;;》细胞周期Cellcycle,从一次细胞分裂(celldivision)结束开始，经过物质积累过程，直到下一次细胞分裂结束为止，所经历的过程称为细胞周期，又称细胞增殖周期(cellreproductivecycle)。

》一个周期所占用的时间，即为细胞的一个世代（generationtime）,在这一过程中,细胞的遗传物质复制并均等地分配给两个子细胞。。;1.1.2PhasesofCellcycle;;一个细胞周期可以人为的划分为先后连续的4个时期（时相）：;各时相持续时间;细胞周期和细胞类群;》G0期细胞和终末分化细胞的界限有时难以划分，有的细胞过去认为属于终末分化细胞，目前可能被认为是G0期细胞。;1.1.3MaineventsofeachPhase;（2）Sphase;（4）Mphase;》检验点checkpoint:在细胞周期中可使细胞周期运转暂时刹车的位点，待条件适宜才允许细胞进入下一阶段。;其他影响细胞周期的事件;1.1.4MensuratetheCellcycle;》基本原理：

－用3H-TdR给待测细胞以脉冲标记（即给动物一次3H-TdR注射，或加3H-TdR于细胞培养液中短暂培养然后洗脱），使在该段时间内已处于S期不同阶段的全部细胞其DNA被3H标记，而处于其它时相的细胞则不被标记。

－随后，每隔一定时间取样做细胞放射自显影，找出正处于有丝分裂的细胞，计算其中带3H标记的细胞占有丝分裂细胞的百分数，绘制曲线即可测得各时相持续时间。;;（2）从洗脱（0时）到标记细胞开始进入M期的时间是G2期持续的时间，记作TG2(为细胞分裂作准备)。(坐标中绿色时间段)

－标记细胞将陆续进入M期，PLM相应升高；;（3）当最早进入M期(细胞一分为二)的标记细胞结束M期时，PLM达到理论最大值=1；所以，从标记细胞开始进入M期到这一时刻所持续的时间即为M期，记作TM，坐标中红色时间段。

;（4）直到最晚进入M期的标记细胞开始进入M期时，PLM始终保持理论最大值=1，然后，随着周期运转PLM值将下降。

那么，从标记细胞开始进入M期到PLM开始下降，所持续的时间段即为S期长，记作TS，对应于图中所有红色时间段。;PLM;（5）如下图，红色时间段对应的又是什么时间？;》优点：PLM法不仅可以细胞周期的总时间，还可测出各时期所持续的时间。

缺点：

－放射自显影技术要求一定的防护措施；

－放射性同位素对细胞周期有一定影响；

－当细胞类群较为复杂时，此法不适用。;（二）流式细胞仪测定法(FlowCytometry);（三）缩时摄像技术

》可以得到准确的细胞周期时间及分裂间期和分裂期的准确时间。;1.1.5CellSynchronization细胞同步化;(一)选择同步化

1）有丝分裂选择法：M期细胞与培养皿的附着性低，振荡脱离器壁收集。

–优点：操作简单，同步化程度高，细胞不受药物伤害。

–缺点：获得的细胞数量较少（分裂细胞约占1%～2%）。

2）细胞沉降分离法：M期细胞体积大，可用离心分离。

–优点：可用于任何悬浮培养的细胞。

–缺点：同步化程度较低。;(二)诱导同步化

1）胸腺嘧啶阻断技术：

–高浓度的胸腺嘧啶能够阻断DNA合成所需的核苷酸的合成,因此将细胞群体培养在具有高浓度的胸腺嘧啶的培养液，可获得同步化的细胞。

–优点：同步化程度高

–缺点：产生非均衡生长，个别细胞体积增大。

;2）中期阻断法

》用秋水仙素等细胞分裂抑制剂将细胞阻断在中期。优点是无非均衡生长现象，缺点是可逆性较差。

3）应用条件依赖性突变株使细胞周期同步化

》将与细胞周期调控有关的条件依赖性突变株转移到限定条件下培养，所有细胞便被同步化在细胞周期中某一特定时期。;1.1.6ExtraordinaryCellcycle;爪蟾早期胚胎细胞SEM照片;（二）酵母细胞的细胞周期

》酵母细胞的细胞周期与标准的细胞周期在时相和调控方面相似；

》酵母细胞周期明显特点:

－酵母细胞周期持续时间较短(约90分钟)；

－封闭式细胞分裂，即细胞分裂时核膜不解体与重建；

－纺锤体不位于细胞质中,而位于细胞核内；

－在一定环境下(环境条件不合适时)，也进行有性繁殖；;（三）植物细胞的细胞周期

》植物细胞不含中心体(中心体是微管组织中心,是纺缍体装配必需的)，但在细胞分裂时可以正常组装纺锤体。

》植物细胞以形成细胞板的形式进行胞质分裂；;（四）细菌的细胞周期P371

》慢生长细菌细胞周期过程与真核细胞周