DB14∕T 1618-2018 转基因抗旱棉花鉴定技术规范.docxVIP

ICS65.020.01B05

DB14

山西省地方标准

DB14/T1618—2018

转基因抗旱棉花鉴定技术规范

2018-01-10发布2018-03-10实施

山西省质量技术监督局发布

DB14/T1618—2018

I

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4抗旱性鉴定 1

5抗旱性判定规则 5

DB14/T1618—2018

II

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草本标准由山西省农业科学院提出并归口

本标准起草单位：山西省农业科学院生物技术研究中心、山西省农业科学院棉花研究所。本标准主要起草人：吴慎杰、张换样、李静、秦丽霞、李盛。

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1

转基因抗旱棉花鉴定技术规范

1范围

本标准规定了转基因棉花抗旱性鉴定方法及判定规则。本标准适用于转基因棉花的抗旱性检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T3543.4农作物种子检验规程发芽试验

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

对照品种

转基因材料的受体材料。

4抗旱性鉴定

4.1发芽试验鉴定

4.1.1将供试种子置于0.1%氯化汞溶液中，灭菌消毒10min～15min。

4.1.2在直径9cm培养皿内放4张定性滤纸，加入10%PEG6000（聚乙二醇）溶液10mL，每皿1个材料，均匀摆放整齐健康籽粒15粒，受体材料种子为对照，重复3～4次。

4.1.3将培养皿放入发芽箱内，25℃发芽7d。

4.1.4分别在萌发后第三天和第七天，测定种子的发芽势和发芽率，评定转基因材料的抗旱性。同时可以测定根长等，反映材料的抗旱性强弱。

4.2苗期抗旱性鉴定

4.2.1旱棚要求

苗期抗旱性鉴定可在旱棚进行。鉴定采用顶部有棚的鉴定池。旱棚顶部离地面高2.5m以上，透光率在85%以上，防雨不遮光，四周平时有利于通风，下雨时能自动降下帘子而不飘雨；鉴定池子为池长20m，宽2m，池深0.5m，有底不透水。

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2

4.2.2试验设计

将转基因纯合系和受体对照种植于旱棚中，随机区组设计，三个小区重复，每个小区种4行，小区长3m,宽1.2m，行距0.30m,株距0.15m。从3叶期开始干旱胁迫，当土壤含水量降低到3%时，停止胁迫进行复水，反复三次，最后调查存活的苗数，以幼苗存活率表示供试材料的抗旱性。

4.2.3播种管理

适期播种，播种前浇水达到种子在大田播种出苗所需的水份，定期管理，使棉苗生长健壮一致，待棉苗长至三叶期，定苗，然后进行干旱胁迫处理。

4.2.4干旱处理方法

叶片卷叶时为目测指标，叶片卷叶时开始进行连续拍照记录叶片萎蔫程度和土壤水分连续测定，拍照直到能区分开转基因材料和受体的表型（种子量小胁迫可以到此为止，复水便于收获到种子），水分测定直到土壤水分降至3%时再进行复水处理。

4.2.5抗旱性评价方法

4.2.5.1抗旱性直接观察

通过直接观察拍照记录的转化事件和受体对照的表型，初步了解该基因对于受体材料抗旱性的影响。

4.2.5.2相对成活苗率计算

反复干旱3次后调查成活苗数，以生长点的死活为成活标准，生长点死的为死苗，生长点活的为活苗，并计算成活苗率和相对成活苗率。依据以下公式计算：

成活苗率（%）=成活苗数×100

每个处理总苗数（1）

相对成活苗率（%）=各转化事件成活苗率×100

受体对照成活苗率（2）

4.3花铃期抗旱性鉴定

花铃期抗旱性鉴定可在旱棚、本地大田适期遮雨和新疆大田适期控水进行。

4.3.1试验设计

将试验区划分为两片区域，用于正常灌水和干旱胁迫。种植转基因纯合系和受体对照，随机区组设计，三个小区重复，每个样本小区面积18㎡（3.6m×5m，行长5m不含走道0.5m），平均株距×行距=0.125m×0.30m。适期播种，种植后浇一次出苗水，然后实行正常灌水和花铃期断水胁迫。依次进行拍照记录、田间调查、收获、最终进行考种和测产。

4.3.2胁迫处理

花铃期胁迫组不灌水，胁迫10d后，