DB14∕T 1518-2017 晋汾白猪种质分子鉴定 SSR 标记法.docx

ICS65.020.30B43

DB14

山西省地方标准DB14/T1518—2017

晋汾白猪种质分子鉴定SSR标记法

2017-12-10发布2018-02-10实施

山西省质量技术监督局发布

DB14/T1518—2017

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4原理 2

5试验准备 2

6步骤 2

7判定依据 3

8结果表述 3

附录A（规范性附录）溶液配制说明 4

附录B（资料性附录）FAO-ISAG推荐引物信息表 7

附录C（资料性附录）样品DNA的制备及质控检测 8

附录D（资料性附录）PCR反应体系及程序 10

附录E（资料性附录）扩增产物的银染检测方法 11

附录F（资料性附录）数据分析指标及公式 13

II

DB14/T1518—2017

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由山西农业大学提出并归口。

本标准起草单位：山西农业大学、中国农业大学、大同市种猪场、山西省畜禽繁育工作站、山西天合元动物保健科技有限公司。

本标准主要起草人：高鹏飞、郭晓红、曹果清、李步高、刘剑锋、杨连仲、王效京、刘宏、孙秉耀、石建中、赵万军。

1

DB14/T1518—2017

晋汾白猪种质分子鉴定SSR标记法

1范围

本标准规定了利用SSR标记法进行晋汾白猪品种鉴定的原理、试验准备、步骤、判定依据和结果表述。

本标准适用于晋汾白猪种质分子鉴定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求

NY/T1673畜禽微卫星DNA遗传多样性检测技术规程

SN/T2123出入境动物检疫实验样品采集、运输和保存规范。DB14/T1300晋汾白猪

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

SSR标记

SSR标记，即简单重复序列（SimpleSequenceRepeats,SSR），又称微卫星DNA，由核心序列和两侧的侧翼序列组成，侧翼序列使微卫星特异地定位于染色体上，核心序列重复数的差异形成微卫星高度的多态性。

3.2

参照样品

对应于SSR位点不同等位基因的一组样品。3.3

位点

对应于SSR位点不同等位基因的一组样品。3.4

核心位点

2

DB14/T1518—2017

DNA分子标记法鉴定品种时优先选用的一组位点，具有多态性高、稳定性强、重复性好、分布均匀等特点。

3.5

扩展位点

DNA分子标记法鉴定品种时备选的一组位点，具有重复性好，分布均匀的特点。

4原理

根据SSR侧翼序列设计一对特异引物，利用PCR技术扩增目的片段，由于不同个体SSR重复数不等，电泳后不同长度的PCR产物得以分离，经硝酸银染色加以区分。

5试验准备

5.1实验仪器设备

凝胶成像系统、PCR仪、低温高速离心机、紫外分光光度计、稳压温流电泳仪、高压灭菌器、单道可调移液器(2μl，10μl，20μl，100μl，200μl，1000μl)、微量电子天平、水浴恒温震荡器、电泳槽、普通离心机、紫外检测仪、超纯水仪。

5.2试验所用试剂

血液裂解液、组织DNA提取液和精子裂解液、饱和酚、三氯甲烷、异戊醇、无水乙醇、溴化乙锭、10×TBE或TAE电泳缓冲液、6×上样缓冲液、100bpDNA分子量标记、冰乙酸、琼脂糖、RNA酶、蛋白酶K、丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、过硫酸铵、硝酸银、N,N,N’,N’-四甲基乙二胺（TEMED）、无水碳酸钠、dNTPs、TapDNA聚合酶、超纯水。

5.3溶液配置

溶液配置方法见附录A，除另外说明外，附录A中仅使用确认为分析纯的试剂。

6步骤

6.1样品采集

6.1.1对于动物样品的采集与保存按照SN/T2123的规定执行。

6.1.2采集个体应具备晋汾白猪品种的典型特征，符合DB14/T1300的要求，采集三代内无血缘关系的个体不少于30头，其中雌性数量不少于