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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利说明书
(10)申请公布号CN102597246A
(43)申请公布日2012.07.18
(21)申请号CN201080027545.1
(22)申请日2010.05.21
(71)申请人诺华有限公司
地址瑞士巴塞尔
(72)发明人P·道米策M·弗兰蒂P·苏帕菲帕特P·马森B·基纳S·克罗塔
(74)专利代理机构上海专利商标事务所有限公司
代理人余颖
(51)Int.CI
C12N15/85
权利要求说明书说明书幅图
(54)发明名称
使用非内源polI启动子的反向遗传
(57)摘要
在宿主细胞中用polI启动子驱动转
基因表达，所述启动子对和衍生所述宿主
细胞的分类学目相同的生物是非内源的。
法律状态
法律状态公告日法律状态信息法律状态
权利要求说明书
1.含至少一种编码病毒RNA分子的表达构建体的宿主细胞，其中所述构建
体的所述病毒RNA分子的表达由所述宿主细胞分类学目的非内源polI
启动子控制。
2.一种具有至少一种内源polI启动子和至少一种非内源polI启动子的细
胞，所述细胞内源polI启动子控制内源rRNA的表达，所述非内源pol
I启动子控制病毒RNA或其互补物的表达。
3.一种生产重组病毒的方法，所述方法包括将如权利要求1或2所述的细
胞在表达所述病毒RNA分子的条件下培养以生产病毒的步骤。
4.一种制备病毒的方法，所述方法包括步骤：(i)如权利要求3所述的方
法生产重组病毒；(ii)用获自步骤(i)的病毒感染培养宿主；(iii)培养
来自步骤(ii)的宿主以生产更多病毒；和(iv)纯化获自步骤(iii)的病毒。
5.一种制备疫苗的方法，包括步骤(a)用权利要求4所述的方法制备病毒
和(b)从所述病毒制备疫苗。
6.如上述权利要求中任一项所述的细胞或方法，其特征在于，所述polI
启动子为灵长类polI启动子且所述细胞为非灵长类细胞。
7.如权利要求1-5中任一项所述的细胞或方法，其特征在于，所述polI
启动子为非犬polI启动子且所述细胞为犬细胞。
8.如权利要求7所述的细胞或方法，其特征在于，所述polI启动子为人
polI启动子且所述细胞为犬细胞。
9.如权利要求8所述的细胞或方法，其特征在于，所述细胞是MDCK细
胞。
10.如权利要求9所述的细胞或方法，其特征在于，所述MDCK细胞为细
胞系MDCK33016(DSMACC2219)。
11.如上述权利要求中任一项所述的细胞或方法，其特征在于，所述细胞包
括至少一种双向表达构建体。
12.如上述权利要求中任一项所述的细胞或方法，其特征在于，所述表达构
建体为表达载体或线性表达构建体。
13.如上述权利要求中任一项所述的细胞或方法，其特征在于，所述病毒为
分节段病毒。
14.如上述权利要求中任一项所述的细胞或方法，其特征在于，所述病毒为
非分段病毒。
15.如上述权利要求中任一项所述的细胞或方法，其特征在于，所述病毒为
负链RNA病毒。
16.如权利要求15所述的细胞或方法，其特征在于，所述病毒为流感病毒。
说明书
p本专利申请要求2009年5月21
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