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新型化合物SCR-1693抗阿尔茨海默病作用及分子机制研究

阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease,AD)是一种神经退行性疾病,也是老年

痴呆症中占比最多的亚型。在细胞水平上,AD的主要病理特征为细胞外β-淀粉

样蛋白(Aβ)聚集形成的老年斑块和细胞内tau蛋白过度磷酸化导致的神经纤维

缠结,并伴随神经元细胞丢失,线粒体功能异常等;在临床症状上,AD主要表现为

渐行性记忆丢失和其他认知功能障碍,严重影响患者日常生活。

已批准用于改善AD症状的药物只有4个乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制剂(他可林、

多奈哌齐、卡巴拉丁和加兰他敏)和1个N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体阻断

剂(美金刚),但至今尚没有能够治愈或阻止/延缓疾病进程的抗AD药物。

SCR-1693是全新化学合成小分子化合物,其分子母核糅合了四氢氨基吖啶和二

氢吡啶结构。

药物化学设计初衷为SCR-1693单一分子能保留两个母核功能基团的靶点活

性,前者发挥乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制活性,以此达到改善AD患者临床症状的目

的;后者发挥阻断钙通道活性,以此来维持细胞内钙平衡,达到延缓AD疾病进程

的目的。体外酶活试验表明,SCR-1693为选择性的、非竞争型的、可逆的AChE

抑制剂,能浓度依赖性地抑制AChE活性,其IC50为0.668μM,其Ki为0.97μ

M,而对丁酰胆碱酯酶(BuChE)没有抑制活性。

单剂量灌胃给予SCR-1693能剂量依赖性地抑制大鼠脑内AChE活性,而对外

周系统中血浆AChE无明显抑制作用。在高浓度KCl诱导SH-SY5Y去极化开放细

胞膜上钙离子通道实验中,SCR-1693浓度依赖性地阻断钙离子内流,其IC50为

28.59μM。

在大鼠背根神经节神经元细胞中,手动膜片钳记录L型钙通道电流的结果表

明,0.1和1.0μMSCR-1693对L型钙离子通道电流抑制率分比为38.14%和

61.76%;在相同摩尔浓度条件下,其抑制活性强于L型钙通道阻断剂硝苯地平

(nifedipine)。在稳定表达人钙通道的细胞系中,采用全自动膜片钳技术记录细

胞钙电流信号,包括hCav1.2(L-型钙通道)、hCav2.1(P/Q-型钙通道)、

hCav2.2(N-型钙通道)hCav3.2(T-型钙通道)等。

实验结果表明,SCR-1693能抑制上述钙离子通道电流,但未表现出明显选择

性。SCR-1693在10μM浓度下能分别抑制L型(29.7%)、P/Q型(12.5%)、N型

(18.6%)以及T型(20.8%)钙离子通道电流。

综上,SCR-1693是选择性的、可逆的、非竞争型AChE抑制剂和非选择性电

压门控钙离子通道(VGCCs)阻断剂。在Aβ25-35诱导人神经母细胞瘤细胞株

SH-SY5Y损伤模型中,SCR-1693能浓度依赖性地抑制Aβ25-35诱导的细胞死亡。

在0.02～2.5μM浓度范围内,SCR-1693能显著减少Aβ25-35诱导的细胞

死亡。在相同摩尔浓度(0.1μM和0.5μM)条件下,SCR-1693的保护作用优于

AChE抑制剂多奈哌齐(donepezil)和L-型钙通道阻断剂尼伐地平(nilvadipine)

两者单独和组合给药。

这提示,SCR-1693发挥了AChE抑制剂和VGCC阻断剂在神经保护作用上协同

机制,其表现出的保护作用优于单靶点(AChE或VGCC)药物。在小鼠侧脑室

(i.c.v.)注射寡聚化Aβ25-35模拟家族性AD(familialAD,FAD)动物模型中,灌

胃给予SCR-1693能显著改善i.c.v.-Aβ小鼠在Morris水迷宫和Y迷宫中的学

习和记忆能力,能减少Aβ诱导引起的小鼠海马锥体神经元死亡。

值得注意的是,0.3和1mg/kg剂量的SCR-1693给药发挥的作用优于现有临

床用药多奈哌齐和美金刚(memantine)。同时,SCR-1693治疗能剂量依赖地改善

i.c.v.-Aβ小鼠海马CA1区神经突触传递功能和保护i.c.v.-Aβ小鼠的长时程

增强(LTP)诱导;能显著调控与突触可塑性相关的CaMKⅡ、ERK、CREB磷酸化水平。

SCR-1693(0.3和1.0mg/kg)保护突触功能和LTP诱导的作用与多奈哌齐治