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金针菇液体菌种生产技术规程

1范围

本标准规定了金针菇（Flammulinavelutiper）液体菌种生产基本要求、液体菌种制备、液体菌种质量指标、贮藏、记录及存档等技术要求。

本标准适用于金针菇液体菌种的生产。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB150.1压力容器第1部分：通用要求

GB4789.28食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求

GB5749食品安全国家标准生活饮用水卫生标准

GB/T12728食品安全国家标准食用菌术语

GB/T37671食品安全国家标准金针菇菌种

NY/T528食品安全国家标准食用菌菌种生产技术规程

NY/T1731食品安全国家标准食用菌菌种良好作业规范

3术语和定义

GB/T12728界定的以及下列术语和定义适用于本文件。

3.1

摇瓶液体菌种liquidspawnculturingbyErlenmeyerflaskonashaker由母种转接到液体培养基中在摇床上恒温振荡扩大培养而成的菌丝体纯培养物。

3.2

发酵罐液体菌种liquidspawnculturingbyfermentationtank

由摇瓶液体菌种转接到发酵罐液体培养基中恒温培养而成的菌丝体纯培养物。

3.3

发酵罐fermentationbioreactor

进行发酵培养的专用设备，也称发酵反应器。

3.4

罐压pressureoffermentationbioreactor

食用菌液体菌种培养过程中培养器保持的空气压力，单位：Mpa。

3.5

通风量ventilationvolume

液体菌种培养过程中每分钟通入培养基中的无菌空气的量。用V/V（培养基体积/通入空气体积）表示。

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3.6

3.7

空消emptyfermentersterilization

利用蒸汽对无物料的发酵罐及附属设备进行加热灭菌的过程。

实消intermittentsterilization

将蒸汽通入装有培养基的发酵罐中进行加热灭菌的过程。

4生产基本要求

4.1工作人员

具有食用菌菌种生产技术的专业技术人员和检验人员。

4.2场地

菌种生产场地应符合NY/T528的规定。环境卫生应符合NY/T1731的规定。

4.3厂房

生产厂房应符合NY/T528的规定。

4.4生产设施与设备

设备与设施应符合NY/T528的规定。液体种发酵罐质量应符合GB150.1的规定。

4.5培养原料

培养基原料应符合NY/T528的规定。生产用水标准应符合GB5749要求。

4.6生产品种

选用高产、优质、抗逆性强、商品性好的金针菇品种，从具相应资质的供种单位引种或本单位选育，并能清楚地追溯菌种来源。菌种生产过程应符合NY/T528的要求。

5液体菌种制备

5.1母种制备

5.1.1培养基配方

马铃薯（去皮煮汁）200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂20g/L，pH自然。

5.1.2菌种接种与培养

母种活化操作流程应符合NY/T528要求。

将保存的母种切割成2mm～4mm接种到培养基中，培养温度19℃~22℃,避光恒温培养7d～9d，菌丝长满试管或者培养皿检验合格即可使用。活化后母种质量应符合GB/T37671要求。

5.2摇瓶液体菌种制备

5.2.1摇瓶液体菌种容器

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使用1000mL的无色或近无色的玻璃三角瓶，用棉塞、硅胶塞、专用封口透气膜封口。

5.2.2培养基配方

豆粕粉10g/L，蔗糖25g/L，硫酸镁0.5g/L，磷酸二氢钾0.5g/L，pH自然。

5.2.3培养基配制

按液体培养基配方配制，混合均匀，装入摇瓶中，装液量为摇甁容量的50%～60%，摇瓶中放置磁力搅拌棒，封口。

5.2.4灭菌

将分装好的摇瓶放入高压灭菌锅内，检查锅内水位，立即灭菌。灭菌蒸汽压力升至0.11MPa～0.12MPa，恒压维持30min～40min。

5.2.5接种

待培养基冷却至25℃以下，在无菌条件下，用打孔器打孔（5mm孔径）或接种钩取（5mm×5mm）4块活化的母种菌块迅速转接于摇甁培养基内，封口。

5.2.6培养

摇瓶接种后移至恒温摇床中，培养温度19℃~22℃,转速150r/min，避光培养7d，菌种长满后置于1000r/min磁力搅拌器上搅拌10m