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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利说明书
(10)申请公布号CN102660523A
(43)申请公布日2012.09.12
(21)申请号CN201210123955.7
(22)申请日2012.04.25
(71)申请人哈尔滨众生北药生物工程有限公司
地址150007黑龙江省哈尔滨市南岗区红旗大街162号301室
(72)发明人陈喜君王辉
(74)专利代理机构北京科龙寰宇知识产权代理有限责任公司
代理人孙皓晨
(51)Int.CI
C12N9/64
A61K38/48
A61P7/02
A61P9/00
权利要求说明书说明书幅图
(54)发明名称
一种低免疫原性蚓激酶及其制备方
法和应用
(57)摘要
本发明公开了一种低免疫原性蚓激
酶及其制备方法和应用，属于生物制药领
域。本发明的方法包括首先从蚯蚓中提取
得到蚓激酶粗品，然后粗品通过离子交换
柱进行洗脱，纯化，收集具有纤溶活性的
组分，冷冻干燥浓缩，浓缩后的蚓激酶溶
液用凝胶过滤色谱柱进行分离，用琼脂糖-
纤维蛋白平板法检测纤溶活性，收集具有
纤溶活性的第二个洗脱峰，经SDS
电泳检测，其分子量为23500-27500Da，
洗脱峰经透析脱盐低温冷冻干燥后采用活
化的单甲氧基聚乙二醇以及右旋糖酐对其
进行分子修饰，即得。通过本发明制备得
到的蚓激酶具有免疫原性小，酶活力高等
特点，能够用于抗血栓药物以及治疗或预
防心脑血管疾病药物的研究和制备。
法律状态
法律状态公告日法律状态信息法律状态
2021-06-29专利权的转移专利权的转移
2014-01-08授权授权
2012-10-24实质审查的生效实质审查的生效
2012-09-12公开公开
权利要求说明书
1.一种制备低免疫原性蚓激酶的方法，其特征在于包括首先从蚯蚓中提取
得到蚓激酶粗品，然后粗品通过离子交换柱进行洗脱，纯化，收集具有纤溶
活性的组分，冷冻干燥浓缩，浓缩后的蚓激酶溶液用凝胶过滤色
谱柱进行分离，用琼脂糖-纤维蛋白平板法检测纤溶活性，收集
具有纤溶活性的第二个洗脱峰，经SDS电泳检测，其分子
量为23500-27500Da，洗脱峰经透析脱盐低温冷冻干燥后采用活化
的单甲氧基聚乙二醇以及右旋糖酐对其进行分子修饰，即得。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：具体的，包括以下步骤：
(1)蚓激酶粗品的制备：
取新鲜蚯蚓，水洗数次，清水浸泡除去内脏中的污物，然后加入水，并加
入苯甲酸钠防腐，置于40℃-50℃水浴加热自溶8-10h，离心，弃去沉淀，
抽滤；滤液加入固体
(NHsub4/sub)sub2/subSOsub4/sub使得
(NHsub4/sub)sub2/subSOsub4/sub的浓度为30-40％，在4℃下保存
3h-5h，用离心机离心，取得上清液，加
(NHsub4/sub)sub2/subSOsub4/sub使得
(NHsub4/sub)
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