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Fh8明显增强PCV2Cap蛋白的可溶性表达及抗原性

郭芸芸;张碧成;孙小涵;汪伟;何孔旺;牛家强;张雪寒

【摘要】猪圆环病毒2型(Porcinecircovirustype2,PCV2)的主要功能蛋白Cap

蛋白,很难在体外获得可溶性表达.本研究旨在以Fh8蛋白为融合标签实现PCV2

ORF2基因在大肠杆菌中的可溶性表达,以小鼠评价可溶性Cap蛋白的抗原性.以病

毒基因组为模板,扩增ORF2靶基因,插入pCold原核表达质粒,成功构建的pCold-

ORF2阳性质粒转入大肠杆菌BL21中.利用SDS分析Cap蛋白的可溶性表

达情况,利用Westernblotting鉴定Cap蛋白的反应原性.重组蛋白与佐剂乳化制

备免疫原,免疫Balb/c小鼠,ELISA方法检测血清中Cap抗体,利用PCR检测组织脏

器中病毒载量,以评估可溶性Cap蛋白的免疫原性.PCR结果表明,Fh8和PCV2

ORF2基因被成功扩增.SDS结果表明Fh8标签显著提高了ORF2在大肠杆

菌中的可溶性表达,分子量35000.Westernblotting结果显示,猪PCV2阳性血清

能够特异性的识别可溶性Cap蛋白.小鼠一次接种Cap蛋白28d后,抗体全部转阳,

免于PCV2的攻击.表明通过新型小标签实现了PCV2ORF2基因的可溶性表达,且

具有良好的免疫原性.%Capproteinisthemainfunctionalproteinofporcine

circovirustype2(PCV2),butitisdifficulttoobtainsolubleexpressionin

vitro.OurobjectwastorealizesolubleexpressionofPCV2ORF2geneby

Fh8-taggedinEscherichiacoli,andtoevaluatetheantigenicityofthe

recombinantCapproteininmice.PCV2DNAwasusedastemplateto

amplifyORF2geneandwasclonedintoprokaryoticexpressionvector

pCold.TheresultantpCold-ORF2plasmidwastransformedintoE.coliBL21.

SDSandWesternblottingassaywereusedtoanalyzethesolubility

oftherecombinantproteinandtoidentifyitsreactivity,respectively.The

recombinantproteinandadjuvantwereemulsifiedtopreparevaccineto

immuneBalb/cmice.ThespecificantibodyofCaprecombinantproteinin

serawasdetectedbyELISAmethod,andvirusloadingintissueswas

detectedbyPCR.So,theimmunogenicityofCapproteincouldbeassessed.

ThePCRresultsshowedthatFh8andPCV2ORF2genesweresuccessfully

amplified.SDSresultsshowedthatsolubleexpressionofORF2inE.

coliwassignificantlyincreasedbyFh8tag,andthemolecularweightwas

35000.WesternblottingresultsshowedthatthesolubleCapproteinwas

recognizedspecificallybyporcinePCV2positivesera.Miceinoculatedwith

theCapproteinvacc