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ICS11.220
B41
备案号:59148-2018DB22
吉林省地方标准
DB22/T2784—2017
水貂阿留申病诊断ELISA法
ELISAmethodforAleutianminkdiseasediagnosis
2017-12-11发布2018-04-01实施
吉林省质量技术监督局发布
DB22/T2784—2017
前言
本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2015给出的规则起草。
本标准由吉林省畜牧业管理局提出并归口。
本标准起草单位:中国农业科学院特产研究所。
本标准主要起草人:张蕾、闫喜军、张海玲、胡博、刘昊、程悦宁、白雪、赵建军、朱言柱、吕爽、
薛向红、邓晓禹、史宁、鲁荣光、王洋、廉士珍。
I
DB22/T2784—2017
水貂阿留申病诊断ELISA法
1范围
本标准规定了水貂阿留申病诊断的缩略语、原理、试剂和材料、仪器和设备、操作方法和结果判定。
本标准适用于水貂和雪貂水貂阿留申病的实验室检测。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3缩略语
下列缩略语适用于本文件。
AD:水貂阿留申病(AleutianDisease)
AMDV:水貂阿留申病毒(AleutianMinkDiseaseParvovirus)
ELISA:酶联免疫吸附试验(Enzyme-linkedImmunosorbentAssay)
OD值:光密度(OpticalDensity)
TMB:四甲基乙二胺联苯胺(3,3,5,5-tetramethylbenzidine)
HRP:辣根过氧化物酶(HorseradishPeroxidase)
DMSO:二甲基亚砜(Dimethylsulfoxide)
4原理
用制备的水貂阿留申病毒抗原,包被聚苯乙烯微量板孔,使免疫反应在固相载体上进行。当备检血
清中有水貂阿留申病毒抗体存在时,则与固相载体上的抗原形成抗原-抗体复合物,再与酶标记的抗体
(抗貂免疫球蛋白)反应,最后通过测定酶作用底物催化后的产物,进行水貂阿留申病毒抗体的定性、
定量测定。
5试剂和材料
除有特殊说明外,所有试验用试剂均为分析纯。蒸馏水,符合GB/T6682中三级水的要求。
5.1包被液,取NaCO1.59g,NaHCO2.93g,用氢氧化钠溶液调pH至9.6,蒸馏水定容至1L,
233
采用0.5μm滤器过滤,存放于4℃冰箱。
5.296孔酶标板。
5.3洗涤液,pH7.4TBST缓冲液,取NaCl8.00g,KCl0.20g,Tris-base1.21g,Tween-201.00
mL,用盐酸或氢氧化钠溶液调pH至7.4,加蒸馏水定容至1L。
1
DB22/T2784—2
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