高效RIPA组织细胞裂解液使用说明书.PDFVIP

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高效RIPA组织/细胞裂解液使用说明书

货号：R0010

规格：20ml/100ml

PMSF0.3ml/1.5ml

本产品配有一支（）

保存：RIPA裂解液2-8℃保存，PMSF-20℃保存。

使用说明（仅供参考）：

如发现RIPA有沉淀，请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。

1mlRIPA10ulPMSFPMSF1mMPMSF

根据使用量，取每加入，使的最终浓度为。混匀备用（

现用现加）。样本裂解均需要冰上或低温操作，裂解时间20-30分钟。

1、样品前处理：

a)PBS6

对于贴壁细胞：去除培养液，用、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照孔板每孔细

胞量加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。

b)6150-250

对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照孔板每孔细胞量加入

ul裂解液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。

如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞管，然后再裂解。/

c)对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250ul裂解液的比例

加入裂解液。如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当(

减少裂解液的用量。用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。)

2、后处理：

10000-14000g3-5

将裂解后的样品离心分钟，取上清，即可进行后续的蛋白浓度测定、

SDSWesternblotting

、和免疫沉淀等操作。

注意事项：

本试剂为强烈型裂解液，可以提取核蛋白，但在提取核蛋白的同时，也会将基因组一并释放出

来，若细胞量多会造成细胞裂解液粘稠：此时可以超声打断基因组或者直接加入蛋白上样缓冲液，

SDS1%

煮沸再离心，离心后直接上样电泳；若想测定浓度，可加入少量（），煮沸后离心测浓度。

本系列蛋白提取试剂所提取的蛋白由于含有去污剂，所以不适合使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒，

请选择BCA法或者Lowry法检测蛋白浓度。

如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散粘稠状物，随后离

心取上清用于后续实验。

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