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王大伟等核心蛋白聚糖在肝癌细胞HepG2中定点整合和表达系统的建立第3期·617·

HepG2中定点整合和表达系统的建立

（，132013）

王大伟鞠文博王朝辉北华大学吉林吉林

〔〕（DCN）HepG2。JM109DCN

摘要目的将核心蛋白聚糖真核表达载体转染到细胞中并检测其表达方法经大肠杆菌介导真核表达载

HepG2，，RT-PCR、。MTT，

体转染细胞经博莱霉素筛选建立稳定转染的细胞株采用免疫组化检测其表达检测细胞增殖活力流式细胞仪分析细胞周

，DCN。RT-PCRDCNmRNA，DCN。

期检测表达情况结果可见转染组细胞表达明显增多免疫组化可见转染组细胞蛋白表达明显增高细胞生长

；DCN。DCNHepG2，DCNHepG2。

曲线显示转染组细胞生长缓慢表达增高结论本研究成功建立稳定转染的细胞株证实可抑制的生长

〔〕；HepG2；MTT

关键词核心蛋白聚糖

〔〕R329.2〔〕A〔〕1005-9202（2013）03-0617-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2013.03.053

中图分类号文献标识码文章编号

（DCN）EcoRI、XbaIpFRT/laczeo-

核心蛋白聚糖是含有丰富亮氨酸的小分子蛋白多以限制性内切酶双酶切重组质粒

（SLRP），44kDDCN，pFRT/laczeo-DCNPCR，

糖家族的一个重要成员其主要成分是一个左并以重组质粒为模板进行反应

右的核心蛋白和一条硫酸皮肤素侧链〔1，2〕。许多研究发现进行初步鉴定。初步鉴定正确的质粒送上海生工生物工程技

DCN、、〔3，4〕，术服务有限公司进行测序。

可以抑制肝乳腺结肠等组织来源的肿瘤细胞生长

但有关DCN对肝癌的研究报道较少。本文通过基因重组技术1.4免疫组化法检测稳定转染细胞株中DCN蛋白的表达

DCN，

构建的真核表达体系建立稳定转染的人肝癌细胞24，

将经过处理的盖玻片放入孔板内每个盖玻片