在酵母中生产D-乳酸的方法与材料 .pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利说明书

(10)申请公布号CN1735683A

(43)申请公布日2006.02.15

(21)申请号C1

(22)申请日2003.05.30

(71)申请人卡吉尔道有限责任公司

地址美国明尼苏达州

(72)发明人V·赖格里亚C·A·敦东S·奥尔松P·索米宁B·豪斯

(74)专利代理机构中国国际贸易促进委员会专利商标事务所

代理人程泳

(51)Int.CI

权利要求说明书说明书幅图

(54)发明名称

在酵母中生产D－乳酸的方法与材

料

(57)摘要

本发明涉及生物催化剂，它们是细

胞，最好是Crabtree阴性表型的细胞，含

有编码对该细胞而言异源的基因之表达载

体，能够提高有机产物的产量。更具体而

言，本发明涉及遗传修饰的克鲁维酵母细

胞，制备该克鲁维酵母细胞的方法，以及

它们在生产有机产物，特别是D－乳酸中

的用途。

法律状态

法律状态公告日法律状态信息法律状态

权利要求说明书

1.来自不能自然积累丙酮酸的种的一种重组酵母细胞，它含有整合到其基因组内的

至少一个外源D-乳酸脱氢酶基因，其中该D-乳酸脱氢酶基因与功能启动子和终止

子序列有效连接。

2.权利要求1的重组酵母细胞，它属于假丝酵母属(Candida)或克鲁维酵母属

(Kluyveromyces)。

3.权利要求2的重组酵母细胞，其中该细胞属于C.sonorensis或马克斯克鲁维酵母

(K.marxianus)种。

4.权利要求1的重组酵母细胞，其中所述启动子序列与对于该酵母种而言天然的启

动子至少90％同源。

5.权利要求4的重组酵母细胞，其中所述终止子序列与对于该酵母种而言天然的终

止子至少90％同源。

6.权利要求4的重组酵母细胞，其中所述酵母种含有一个具有天然PDC启动子的

天然PDC基因，所述启动子序列与天然PDC启动子至少90％同源。

7.权利要求6的重组酵母细胞，其中所述天然PDC基因含有一个天然PDC终止子，

所述终止子序列与天然PDC终止子至少90％同源。

8.权利要求7的重组酵母细胞，其中所述天然PDC基因缺失。

9.权利要求1的重组酵母细胞，其中所述酵母种含有天然PDC基因，且天然PDC

基因缺失。

10.权利要求1的重组酵母细胞，其中所述核苷酸序列编码D-乳酸脱氢酶蛋白质，

该蛋白质来源于瑞士乳杆菌(Lactobacillushelveticus)、约氏乳杆菌

(Lactobacillusjohnsonii)、保加利亚乳杆菌(Lactobacillusbulgaricus)、德氏乳杆菌

(Lactobacillusdelbrueckii)、植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)和戊糖乳杆菌

(Lactobacilluspentosus)。

11.权利要求10的重组酵母细胞，其中所述启动子来源于克鲁维酵母属或酵母属的

酵母种。

12.权利要求11的重组酵母细胞，其中所述启动子来源于马克斯克鲁维酵母。

13.权利要求11的重组酵母细胞，其中所述启动子来源于酿酒酵母

(Saccharomycescerevisiae)。

14.权利要求1的重组酵母细胞，它显示降低的PDC活性。

15.权利要求8的重组酵母细胞，其中所述D-LDH基因整合到缺失的PDC基因的

基因座处。

16.一种将碳水化合物发酵为乳酸的方法，包括在发酵条件下在含有可被该细胞发

酵的碳水化合物的培养基中培养权利要求1的细胞。

17.一种将碳水化合物发酵为乳酸的方法，包括在发酵条件下在含有可被该细胞发

酵的碳水化合物的培养基中培养权利要求8的细胞。

18.一种将碳水化合物发酵为乳酸的方法，包括在发酵条件下在含有可被该细胞发

酵的碳水化合物的培养