病毒环境工程微生物.ppt

二噬菌体的溶源性毒（烈）性噬菌体：侵入宿主细胞后，引起宿主细胞的裂解温和噬菌体：侵入宿主细胞后，其核酸附着并整合在宿主染色体上，和宿主核酸同步复制，宿主细胞不裂解而继续进行正常的分裂繁殖溶原细胞：含有温和噬菌体核酸的宿主细胞原噬菌体：在溶原细胞内的温和噬菌体核酸溶源性：是遗传特性，原噬菌体随宿主细胞分裂传给子代细胞，第25页,共46页，星期六，2024年，5月第26页,共46页，星期六，2024年，5月第四节?病毒的测定与培养一病毒的测定病毒颗粒计数法：间接计数法：病毒感染效价测定法第27页,共46页，星期六，2024年，5月二病毒的培养特征（一）病毒在液体培养基中的培养特征浑浊菌悬液——接种噬菌体——透明裂解液（二）病毒在固体培养基上的培养特征噬菌斑荧光假单胞菌噬菌斑：将噬菌体接种在敏感细菌形成的菌落上，噬菌体在接种部位进行反复感染，将宿主细菌的菌落裂解成空斑，即噬菌斑。?第28页,共46页，星期六，2024年，5月三、病毒的培养基病毒的培养基即相对应的敏感宿主细胞，要具备如下条件：1、?必须是活的敏感动物或是活的敏感动物组织细胞2、?能提供病毒附着的受体3、?敏感细胞内没有破坏特异性病毒限制性核酸内切酶脊椎动物病毒的培养基：胚组织细胞、人组织细胞、人肿瘤细胞、动物组织细胞、鸡、鸭细胞、敏感动物植物病毒的培养基：相应的敏感植株和敏感植株的组织噬菌体的培养基：相应的敏感细菌第29页,共46页，星期六，2024年，5月三、病毒的培养（一）动物病毒的培养动物病毒的培养方法有动物接种、鸡胚接种和组织培养技术。第30页,共46页，星期六，2024年，5月1、动物病毒的空斑试验（1）单层细胞的制备和培养动物组织切成0.5-1mm3小块→洗涤→5%胰酶消化10-15min→收集细胞并计数→加入生长液并分装→37℃培养2-3d即长成单层细胞备用第31页,共46页，星期六，2024年，5月（2）病毒样品的采集与制备固体样品加液体培养基制成悬液，10000r/m离心10min，取上清液备用。液体样品直接离心分离。空气样品用泵抽取至长有宿主细菌的平板上，或是将长有宿主细菌的平板在空气中暴露30-60min。第32页,共46页，星期六，2024年，5月（3）动物病毒的接种与观察空斑：是原代细胞或传代单层细胞被病毒感染后，细胞被病毒蚀空形成的空斑（也称蚀斑）。一个空斑代表一个病毒。通过计数可知单位体积样品中的病毒数。通过病毒空斑单位（plaqueformationunit）?PFU的计数得到单位体积中含有的病毒数病毒接种适当孵育注入软琼脂或羧甲基纤维素培养形成空斑第33页,共46页，星期六，2024年，5月（4）具体培养方法：Hank’s液洗涤培养24-48h的单层细胞接种病毒样品，在37℃恒温箱中吸附1h加琼脂培养基覆盖，置于37℃恒温箱培养24h后加质量浓度0.2%的中性红继续培养至空斑出现取出计数，计算ηPFU第34页,共46页，星期六，2024年，5月2、系列稀释终点病毒的滴度：能产生培养管中的50%CPE（细胞病理效应）的最高稀释度（即最少的病毒量），称为TCLD50（组织培养感染剂量）。若是敏感动物，则用ID50（使50％敏感动物发生变化的感染剂量）或LD50（引起50％敏感动物死亡的致死剂量）表示病毒的滴度。稀释接种培养观察第35页,共46页，星期六，2024年，5月（二）噬菌体的分离培养双层琼脂法第36页,共46页，星期六，2024年，5月第五节?病毒对物理、化学因素的抵抗力及在污水处理过程中的去除效果一、病毒对物理因素的抵抗力对病毒影响最大的物理因素是温度、光和干燥度1、?温度在宿主细胞外的病毒大多数在55-65℃下几分钟到十几分钟被灭活。第37页,共46页，星期六，2024年，5月高温灭活的机制：（1）蛋白质变性。阻碍病毒吸附到宿主细胞上，削弱感染力（2）高于70℃可能破坏核酸。低温不能灭活病毒，通常在-75℃（干冰）或-196℃（液氮）中保存病毒。第38页,共46页，星期六，2024年，5月2、光及其他辐射（1）紫外辐射：灭活的部位是核酸（2）可见光在天然水体和氧化塘中，日光对肠道病毒有灭活作用。光灭活作用：在氧气和染料存在的条件下，大