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流式细胞仪检测细胞周期操作步骤
6
取对数生长期的A549细胞，按1×10cells/mL以1mL接种于
100mm培养皿内
↓
24h后，进行所需的处理（比如加药,照射）
↓
特定时间后终止培养，进行下一步的实验
↓
收集原培养液，洗后的PBS和消化后的细胞，将三者混匀放入15ml
离心管中
↓
1000rpm离心5min（短时低速离心）
↓
弃上清，用1.5ml预冷PBS，1000rpm离心5min后去除PBS和细胞
悬液内的细胞碎片
↓
加入1.5ml预冷PBS,在涡旋状态下加入3.5ml无水乙醇，混匀
后，于4℃固定30min,或-20℃长期保存。
↓
1000r/min,离心5min
↓
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将乙醇吸除，加PBS清洗混匀
↓
1000r/min,5min再离心一遍，将残留在细胞上的乙醇除去
↓
吸除离心管内PBS，加入200ulPBS和2ul的RNA酶（0.25mg/ml）
(37℃下孵育30min)
↓
加入0.5ml的50ug/ml的PI溶液室温下避光染色30min
↓
将离心管内的细胞过滤(300um尼龙网膜)至含有PBS的EP管中（PI
具有很强的粘附性，容易使细胞聚团），标记EP管
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提前一天网上预约
↓
开机（先开仪器后开软件）
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流式细胞仪的结构一般分为5部分：①流动室及液流驱动系统；②
激光光源及光束成形系统；③光学系统；④信号检测、存贮、
显示、分析系统；⑤细胞分选系统。
↓
检测前先涡旋使细胞混匀悬浮呈单个细胞，然后插入流式细胞仪上
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流动室内充满鞘液，细胞排成单列由喷嘴
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