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草莓脱毒原原种苗制备技术规程

范围

本文件规定了草莓脱毒原原种苗制备的术语和定义、外植体的选择、脱毒方法、病毒检测方法、茎尖的初代培养、组培苗的继代扩繁、生根诱导及驯化移栽、原原种苗的保存方式。

本文件适用于草莓脱毒原原种苗的制备。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

NY/T3032-2016草莓脱毒种苗生产技术规程

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

草莓脱毒原原种苗

指脱毒的草莓组培苗移栽于无草莓病源、虫源的隔离区内生长的植株。

微茎尖脱毒

从匍匐茎上切取约0.2mm茎尖分生组织接种至培养基中，分化出的组培苗可脱除病毒。

外植体选择

采集时期

外植体宜在结果后期匍匐茎大量抽生阶段进行采集。

选择要求

选取健壮、无病、开花结果正常的草莓植株作为母株，采集刚抽出且叶片未展开的匍匐茎作为外植体材料。

脱毒与检测

脱毒方法

采用微茎尖脱毒法对草莓匍匐茎外植体材料进行脱毒处理。

病毒检测

针对草莓斑驳病毒(Strawberrymottlevirus,SMoV)、草莓轻型黄边病毒(Strawberrymildyellowedgevirus,SMYEV)、草莓镶脉病毒(Strawberryveinbandvirus,SVBV)利用RT-PCR法进行检测，具体操作依据NYT3032-2016的要求执行。

茎尖初代培养

初代培养基的选择

草莓茎尖初代培养的培养基为MS+0.5mg/L~1.0mg/L6-BA，添加蔗糖30g/L，调节培养基pH值至5.8。

外植体消毒方法

切取匍匐茎顶端2cm左右作为外植体进行消毒，流水冲洗0.5h~2h。在超净工作台下，用75%酒精将外植体浸泡30s，再用1.0%次氯酸钠消毒10min~15min或0.1%升汞溶液消毒5min~10min，无菌水冲洗3次~5次。所用消毒液与外植体体积的比例约为10:1。

茎尖分生组织切取

将消毒后的外植体用无菌滤纸吸干水分。在解剖镜下用镊子将外植体顶端一层一层小心剥开，直至露出茎尖分生组织部分，用锋利的解剖刀切取约0.2mm的茎尖，接种于初代培养基中。

初代培养条件

初始接种的茎尖暗培养2d，之后转置于常规培养条件下培养，培养温度25℃，光照强度3000Lux~5000Lux，光照时间14h/d~16h/d，相对湿度70%~75%。茎尖组织在该培养条件下生长约50d~60d形成幼小无根植株后即可转至继代培养阶段。

组培苗继代扩繁

继代培养基的选择

适宜草莓继代扩繁的培养基为MS+0.1mg/L~0.3mg/L6-BA+0.1mg/LNAA，添加蔗糖30g/L，调节培养基pH值至5.8。

继代过程的条件控制

草莓组培苗继代培养条件为：培养温度25℃，光照强度3000Lux~5000Lux，光照时间14h/d~16h/d，相对湿度70%~75%。继代培养每隔30d~40d需继代一次。用于制备脱毒原原种苗的组培苗在继代次数上应控制在7次以内，总继代培养时间不宜超过一年，即草莓组培苗应在每年重新制备。组培生产过程应参照附录A进行详细登记。

组培苗生根诱导

生根培养基的选择

诱导草莓生根的培养基为1/2MS+0.1mg/LNAA，添加蔗糖30g/L，调节培养基pH值至5.8。

生根过程的条件控制

用生长健壮且无明显变异的组培苗进行生根诱导。选择高度在2cm以上的组培幼苗接种至生根培养基进行生根。一般无根苗转接至生根培养基培养30d左右即有多条根系产生，此时即达到驯化移栽的条件。生根阶段的培养条件与继代过程相同。

组培苗驯化移栽

组培苗的炼苗措施

将达到驯化移栽条件的组培苗移至塑料薄膜（或玻璃）温室或遮阴网室，温室内温度控制在10℃~30℃，保持良好的通风条件，在自然光条件下炼苗7d左右，每天10：00~15：00需进行适当遮荫，避免日光曝晒。采用闭盖炼苗2d、松盖炼苗2d、开盖炼苗3d的方式使组培苗逐渐适应瓶外环境。

移栽基质的准备

移栽基质由草炭、蛭石和珍珠岩按4：3：1的比例复配而成，同时添加氮、磷、钾比例为20：10：20的复合肥料200g/m3。移栽容器采用50孔育苗穴盘，提前装好基质并浇透水备用。

组培苗移栽及栽后管理

移栽时间与方法

组培苗炼苗后叶片舒展变成深绿色且出现表皮毛，此时即可进行移栽。移栽适宜在晴天的傍晚或阴天进行。移栽时需将幼苗用镊子小心地从瓶中夹出，用清水将