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毛冠鹿AIF-1原核载体的构建及表达
周楠楠;杨振;罗丽芸;宋菲;白敏;曹祥荣
【摘要】TheTdAIF-1cDNAwasclonedfromthetestiscDNAlibraryofthe
Tufteddeer(Elaphoduscephalophus)andanalyzedbybioinformatic
methods.PrimersweredesignedaccordingtocDNAsequencetoclonethe
gene.ThegenewasclonedintopMD19-Tvectorforsequencing.Theright
sequencewasdigestedbyrestrictionenzymeandsubclonedintothe
expressionvectorpET-28a(+).AftertransformedintoE.coliBL21(DE3),the
recombinantplasimidwasinducedtoexpressbyIPTG.TheE.coli
BL21(DE3)expressedrecombinantproteinwasbrokenbyultrasonicto
showwhetherthere-combinantproteinwassolubleornot.Lastly,the
solubleproteinwaspurified.Therecombinantproteinwasanalyzedand
identificatedbySDSelectrophoresisandWesternblot.Analysisof
sequenceshowedthattheTdAIF-1cDNAcontaineda438bpopenreading
frameencoding145aminoacids.Therecombinantplasimidwascorrectly
constructedaccordingtosequencingandrestrictionenzymeanalysis.The
recombinantproteinwasabout20kDandsolublemainly.Whenthe
recombinantproteinwaspurified,usingelutionbuffercontaining50
mmol/Lor100mmol/Limidazolecouldgetpurifiedprotein.TheTdAIF-1
ProkaryoticExpressionSystemwasconstructedsuccessfullyand
recombinantproteinwasobtained,whichwashelpfulforthefuturestudy
ofitsbiologicalfunction.%从毛冠鹿睾丸cDNA文库中筛选出毛冠鹿AIF-1基
因,对其进行生物信息学分析,设计引物克隆毛冠鹿AIF-1cDNA,连入pMD19-T载
体,测序正确后酶切,与表达载体pET-28a(+)连接,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱
导表达,将诱导表达重组蛋白的菌体超声破碎后,进行可溶性分析,并对可溶性蛋白进
行纯化,SDS电泳,WesternBlot分析以及鉴定重组蛋白.结果表明,毛冠鹿
AIF-1(TdAIF-1)含有1个438bp的开放阅读框,编码145个氨基酸,经测序和酶切
鉴定后,成功构建重组质粒pET-28a(+)-TdAIF-1,表达大小约20kD的重组蛋白,主
要以可溶形式存在,提高洗脱缓冲液中咪唑浓度至50mmol/L、100mmol/L能够
得到较纯的蛋白.成功构建毛冠鹿AIF-1原核表达体系,获得重组蛋白,为研究AIF-1
蛋白的生物学功能奠定了基础.
【期刊名称】《南京师大学报（自然科学版）》
【年(卷),期】2014(000)002
【总页数】7页(P85-90,95)
【关键词】毛冠鹿;AIF-1;原核表达
【作者】周楠楠;杨
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