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牛MSCs核移植胚胎发育潜能的研究的开题报告

一、研究背景和意义

干细胞（stemcell）具有自我更新、无限增殖、多向分化等特性，

是进行组织工程和再生医学研究的重要基础。目前，常用的干细胞来源

有胚胎干细胞（embryonicstemcell，ESC）、诱导多能干细胞（induced

pluripotentstemcell，iPSC）、成体干细胞（adultstemcell，ASC）等。

其中，脐带MSCs已成为研究热点之一，其具备来源广泛、采集方便、低

免疫原性、多向分化潜能、能够分泌多种生长因子等优点。

而对于牛脐带MSCs还未进行核移植胚胎发育潜能的研究，本课题

旨在探究由牛脐带MSCs构建的克隆胚在体外联合培养体系中的发育潜能

及其对于细胞分化潜能的影响，为基于牛脐带MSCs构建新型生物药物开

辟新的研究方向。

二、研究内容与目标

本课题研究的主要内容是以牛脐带MSCs作为体细胞，构建核移植

的克隆胚，通过体外联合培养体系，探究其在不同环境的发育潜能及细

胞分化潜能。重点研究内容包括：

1.牛脐带MSCs与牛卵母细胞的体外联合体系的建立和优化；

2.构建牛脐带MSCs的克隆胚，评价其外观、发育潜能及其形态学

特征；

3.分析牛脐带MSCs克隆胚的体外发育能力和分化潜能；

4.探究环境因素对牛脐带MSCs克隆胚发育潜能和对细胞分化潜能

的影响；

本课题的研究目标是，通过探究牛脐带MSCs克隆胚在特定环境下

的发育潜能和对细胞分化潜能的影响，为开发以牛脐带MSCs为基础的新

型生物药物奠定研究基础。

三、研究方法和技术路线

（1）实验材料和设备准备

牛脐带MSCs、牛卵母细胞、经过同步发育处理的髓质细胞（作为核

供体）；

实验动物研究许可证明、细胞培养器材、胰酶、复方酶解剂、卵母

胞冻存保护剂、显微镜、PCR仪、琼脂糖、RT-PCR仪等设备和试剂；

（2）体细胞核移植

将采集的牛脐带MSCs处理后与牛卵母细胞体外进行体细胞核移植，

得到克隆胚；

（3）体外联合培养

将得到的克隆胚移植至养分基质为F12+聚乙二醇（PEG）的专用平

皿中，与牛奶素质优良的奶牛卵紫素、囊胚液进行体外联合培养；

（4）体外发育和形态学观察

观察克隆胚在体外联合培养条件下的发育状况和形态学特征，关注

其细胞分化状态和近期生长潜能；

（5）分子生物学检测

采用实时荧光定量PCR（qPCR）和RT-PCR仪分别对克隆胚期外胚

层标记物CDX2、内胚层标记物SOX2、胚胎干细胞标记物OCT4进行表

达定量测定，进一步确定其分化潜能情况。

四、预期结果和成果

预期结果是通过构建牛脐带MSCs克隆胚体外联合培养体系，探究

其发育潜能和分化潜能，在不同的培养环境因素下评价其生长潜能和细

胞发育情况，为以牛脐带MSCs为基础的新生物药物开辟新的研究方向。

本研究将主要围绕以下方面取得科研成果：

1.构建牛脐带MSCs克隆胚体外联合培养体系；

2.评估体外联合培养体系下克隆胚的体外生长和分化潜能；

3.研究环境因素对牛脐带MSCs克隆胚发育潜能和对细胞分化潜能

的影响；

4.在理解牛脐带MSCs克隆胚的发育潜能和细胞分化潜能的基础上，

着手开发以牛脐带MSCs为基础的新生物药物。