《外来入侵昆虫种类的分子鉴定技术规范》.docxVIP

DBS61/××××—202×

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ICS

CCSB

DB61

陕西省地方标准

DB61/T××××—2023

外来入侵昆虫种类的分子鉴定技术规范

TechnicalspecificationforspeciesidentificationofsmallinvasiveinsectbasedonDNA-biocoding

（征求意见稿）

202×–××–××发布202×–××–××实施

陕西省市场监督管理局发布

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目??次

TOC\o1-2\h\u21543目??次 I

26231前??言 II

85751范围 1

26052规范性引用文件 1

296293术语和定义 1

147064方法原理 1

229355仪器设备、试剂与实验准备 1

317526鉴定方法 2

18441附录A 3

22070附录B 4

28816附录C 5

16530附录D 6

27208附录E 7

前??言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由陕西省农业农村厅提出并归口。

本文件起草单位：西北农林科技大学、榆林市榆阳区孟家湾区域农业技术推广站。

本文件主要起草人：张皓、胡想顺、刘彦飞、刘焕星、杨杰、刘小凤、李苗苗、陈艳芬。

本文件首次发布。

本文件由西北农林科技大学负责解释。

联系信息如下：

单位：西北农林科技大学

电话：029地址：陕西省杨凌农业高新技术产业示范区邰城路3号

邮编：712100

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外来入侵昆虫种类的分子鉴定技术规范

范围

本文件规定了外来入侵昆虫的田间调查、取样和分子鉴定等要求。

本文件适用于外来入侵昆虫种类的分子鉴定。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅对该日期对应的版本适用于本文件。不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

SN/T1876医用媒介生物标本采集、制作及保存规程

SN/T2752.4卫生检疫人员的自我防护规范第4部分：实验室人员

SN/T4278国境口岸医学媒介昆虫DNA条形码鉴定操作规程

WS/T230临床诊断中聚合酶链反应（PCR）技术的应用

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1COⅠ基因COⅠgene

COⅠ基因即线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因(CytochromecoxidaseI,COI)，它的突变速度较核DNA快，使物种分离更为准确，且其DNA序列本身很少存在插入和缺失,使序列比对容易操作，可应用于相近物种鉴定。

3.2ITS2基因ITS2gene

ITS2基因核糖体内转录间隔区2，变异速度适中，能够提供较丰富的变异位点和信息位点，位于5.8S与28S之间，可应用于种团、复合体之间进行鉴定。

方法原理

基于线粒体COⅠ基因序列对外来入侵害虫进行鉴定，确定种内差异、种间差异，结合核糖体ITS2基因对种团、复合组进行鉴定。

仪器设备、试剂与实验准备

5.1仪器设备

生物安全柜、高压灭菌锅、离心机、微量分光光度仪、PCR仪、电泳设备、凝胶成像系统等。

5.2主要试剂

动物组织基因组DNA提取试剂盒、PCRPremix、超纯水、DNA标准分子量标（DL2000）。

5.3实验准备

实验室生物安全符合GB19489和SN/T2752.4的规定；PCR防污染措施遵照WS/T230的要求执行。

鉴定方法

6.1取样

标本样品经过冷冻或乙醚麻醉，死后取成批同种样品的单份标本、珍稀单份标本取对称一侧组织（如单侧昆虫足）置于灭菌的洁净1.5mL离心管留用，如长期不用需放置体积