蛋白质化学近年原文.ppt

掌握知识点蛋白质的水解p123蛋白质可以被酸、碱或蛋白酶催化水解，根据水解程度可分为完全水解和部分水解：完全水解（彻底水解）得到各种氨基酸的混合物，酸或碱能够将多肽完全水解；酶水解一般是部分水解（不完全水解），得到各种大小不一的肽段和氨基酸。酸、碱、酶水解蛋白质的优缺点：酸水解常用6mol/L的盐酸或4mol/L的硫酸在105-110℃条件下进行水解，反应时间约20h；此法的优点是不容易引起水解产物的消旋化，得到的是L-氨基酸。缺点是色氨酸被沸酸完全破坏；含有羟基的氨基酸如丝氨酸或苏氨酸有一小部分被分解；天冬酰胺和谷氨酰胺侧链的酰胺基被水解成了羧基。碱水解一般用5mol/LNaOH煮沸10-20小时。由于水解过程中许多氨基酸都受到不同程度的破坏，产率不高。部分的水解产物发生消旋化，其产物是D-型和L-型氨基酸的混合物。该法的优点是色氨酸在水解中不受破坏。酶水解用于Pr肽链断裂的一般是蛋白水解酶（proteolyticenzyme）/蛋白酶（proteinase）应用酶水解多肽不会破坏氨基酸，也不会发生消旋化。水解不完全，产物为较小的肽段。最常见的蛋白水解酶有以下几种：胰蛋白酶（trypsin）、糜蛋白酶（chymotrypsin）、胃蛋白酶（pepsin）、嗜热菌蛋白酶（themolysin）。生物体内的AA类别二十种常见蛋白质AA的分类与结构特点中性脂肪族氨基酸酸性氨基酸及酰胺碱性氨基酸杂环氨基酸芳香族氨基酸非极性R基团氨基酸(Gly-Ala-Val-Leu-Ile-Phe-Met-Pro-Trp疏水性逐渐增大)极性不带电荷R基团氨基酸带电荷R基团氨基酸AA的化学反应p135-1431.由氨基参加的反应：与HNO2的反应、酰基化和烃基化反应、形成西佛碱反应、脱氨基反应2.由羧基参加的反应：成盐和成酯反应、成酰氯反应、成酰胺反应、脱羧反应、叠氮反应3.由氨基和羧基共同参加的反应：与茚三酮反应、成肽反应、离子交换反应4.由侧链R基团产生的反应：-SH、-OH、咪唑基、胍基、苯环、酚基等——氨基酸（或蛋白质）颜色反应与2,4一二硝基氟苯(DNFB)的反应————sanger反应，测定Pr的N端AA种类————烃基化反应与苯异硫氰酸酯（PITC）的反应————Edman反应，重复测定Pr多肽链N端AA种类（多肽顺序自动分析仪）————烃基化反应脯氨酸与茚三酮反应的产物：基本步骤：装柱上样分步洗脱分步收集简单蛋白质分类结合蛋白质分类蛋白质顺序测定主要步骤不同生物来源的细胞色素c中不变的AA残基

反应名称试剂颜色反应有关基团有此反应的蛋白质或氨基酸双缩脲反应NaOH、CuSO4紫色或粉红色二个以上肽键所有蛋白质米伦反应HgNO3Hg(NO3)2及HNO3混合物红色?Tyr黄色反应浓HNO3黄色、橘色?TyrPhe乙醛酸反应(Hopking-Cole反应)乙醛酸试剂及浓H2SO4紫色?Trp坂口反应(Sakaguchi反应)α-萘酚、NaClO红色胍基Arg酚试剂反应(Folin-Cioculteu反应)碱性CuSO4及磷钨酸-钼酸蓝色酚基Tyr茚三酮反应茚三酮蓝色自由氨基及羧基α-氨基酸?氨基酸/蛋白质的颜色反应—OHNAA的紫外吸收:在可见光范围内无光吸收，在近紫外区含苯环AA有光的吸收；蛋白质由于含有这些含苯环的氨基酸，所以也有紫外吸收能力，一般最大吸收在280nm波长处。AA的紫外吸收性质p145组成Pr的AA中Trp(280nm)、Tyr(275nm)、Phe（257nm）对紫外光有一定的吸收（分子中含有苯环的共轭双键造成的），且都在280nm附近。蛋白质的化学组成和分类p157肽和肽键的结构p163天然存在的活性肽p167蛋白质一级结构的测定p168-180同源Pr的物种差异与生物进化p181-184蛋白质主要元素组成：C、H、O、N、S及P、Fe、Cu、Zn、Mo、I、Se等微量元素。含量%：50～556～720～2315～170.3～3微量或无元素组成：CHONS其它蛋白质平均含N量为16％,这是凯氏定氮法测蛋白质含量的理论依据：蛋白质含量＝蛋白质