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铜绿假单胞菌脂多糖对白念珠菌生物膜形成的影响

邓娟;孙伟;苏建荣

【摘要】目的研究铜绿假单胞菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对白念珠菌生

物膜形成不同时期的影响.方法甲基四氮盐(XTT)减低法用于检测铜绿假单胞菌LPS

对白念珠菌生物膜形成不同阶段生成量的影响,利用倒置显微镜观察生物膜形态学

改变.结果铜绿假单胞菌对白念珠菌生物膜形成的影响具有阶段差异性和浓度差异

性.结论铜绿假单胞菌LPS抑制白念珠菌生物膜菌丝的形成.

【期刊名称】《中国真菌学杂志》

【年(卷),期】2016(011)006

【总页数】4页(P337-340)

【关键词】铜绿假单胞菌;脂多糖;白念珠菌;生物膜

【作者】邓娟;孙伟;苏建荣

【作者单位】首都医科大学附属北京友谊医院临床检验中心,北京100050;首都医

科大学附属北京友谊医院临床检验中心,北京100050;首都医科大学附属北京友谊

医院临床检验中心,北京100050

【正文语种】中文

【中图分类】R379.4

念珠菌与革兰阴性杆菌败血症是危重患者重要致死原因之一。近年来，由于各种体

内植入物(如心脏支架、口腔种植材料、导尿管等)、抗生素的滥用、HIV感染及应

用免疫抑制剂等因素，白念珠菌血症感染率逐年升高[1]。白念珠菌能够黏附在导

尿管、心脏支架、静脉插管、人工关节等人体植入物上形成生物膜[2]，从而对机

体造成损害及对抗真菌药物产生明显耐药性[3]。因此，减少或阻断生物膜的形成

可以有效提高抗真菌治疗效果，提高患者生存率。

铜绿假单胞菌是人体常见的机会致病菌，也是医院获得性血流感染的常见致病菌，

而脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)是铜绿假单胞菌的主要致病成分之一，是革

兰阴性杆菌细胞壁的特有结构，又名内毒素，其可通过促炎反应和免疫调节机制引

起发热、糖代谢紊乱、内毒素休克等[4]。脂多糖促炎性在脓毒症休克致病机制中

起着重要作用[5]。尽管脂多糖对白念珠菌生物膜形成的体外实验数据较少，但许

多体内研究表明脂多糖对白念珠菌感染的影响[6-7]。

本研究通过构建体外白念珠菌生物膜模型，采用甲基四氮盐(XTT)法检测不同浓度

铜绿假单胞菌脂多糖对白念珠菌生物膜形成的影响，期望能为临床治疗混合性感染

提供一定帮助，也期望能为研发新型抗真菌药物提供一定的实验室依据。

1.1材料

菌株白念珠菌标准菌株ATCC900281株(受赠于首都医科大学附属北京佑安医

院临床检验中心微生物室)，白念珠菌标准菌株SC53141株，临床血培养阳性标

本分离的32株白念珠菌，均来自首都医科大学附属北京友谊医院临床检验中心细

菌室，使用前脱脂牛奶-70℃保存。

培养基沙氏培养基(SDA)购自Oxiod公司；RPMI-1640培养液购自Gibco公司；

酵母氮源培养基(Yeastnitrogenmedium，YNB)购自Difco公司，称取YNB

3.35g、葡萄糖10g，加蒸馏水定容至500mL，0.45μm微孔滤器过滤除菌，4℃

保存。

主要试剂铜绿假单胞菌LPS、甲基四氮盐(XTT)、甲萘醌均购自Sigma公司：

LPS用RPMI-1640溶液调整成100μg/mL～0.001μg/mL浓度；XTT用无菌

PBS缓冲液(购自Solarbio公司)稀释配成0.5mg/mL饱和溶液，0.22μm微孔

滤器过滤除菌，分装后-20℃冰箱冻存；甲萘醌用丙酮(北京化学试剂厂，分析纯)

新鲜配制成浓度为10mmol/L溶液。

仪器恒温摇床，酶标仪，细胞计数板，倒置显微镜(Olympus，日本)。

1.2方法

念珠菌生物膜的制备将从-70℃冰箱保藏的待测菌株接种于SDA培养基上，37℃、

5%CO2培养18h。取一接种环菌量至YNB培养液中，37℃摇床(75r/min)培养

过夜，离心，弃上清，PBS液离心洗涤2次(4000r/min，5min)。用含或不含

有不同浓度LPS(100μg/mL～0.001μg/mL)RPMI-1640液体培养基稀释菌液，

显微镜下用细胞计数板将菌液浓度调整至5×106cells/mL。取100μL上述菌液

接种至无菌96孔板中，37℃摇床(75r/min)培养90min，然后用PBS轻轻洗涤

2次，以洗掉未黏附的念珠