1.2.2 微生物的选择培养和计数课件-高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx

第2节微生物的培养技术及应用第1章发酵工程

平板划线法稀释涂布平板法纯化原理接种工具单菌落的获得用途接种效果图相同点通过连续划线将聚集的菌种逐步稀释分散将菌液梯度稀释，然后将不同稀释程度的菌液分别涂布到固体培养基表面，经培养得到单菌落接种环涂布器最后划线区域挑取稀释度合适，整个平板上都可找到单菌落分离纯化菌种，获得单菌落;不能计数①分离纯化菌种，获得单菌落②可用于计数①都能分离纯化菌种；②都是在固体培养基上进行的两种纯培养方法的比较问题1:怎么通过稀释涂布平板法统计活菌的数目呢？还有哪些统计活菌的方法呢？

（一）统计菌体数目：12显微镜直接计数法稀释涂布平板计数法血细胞/细菌计数板——间接计数法——直接计数法稀释103倍稀释104倍稀释105倍空白对照微生物的数量测定

微生物的数量测定课本P181.间接计数法——稀释涂布平板法当样品的稀释度时，培养基表面生长的一个，来源于中的一个。通过计数平板上的数，就能推测出样品中大约含有多少。(1)原理：足够高菌落样品稀释液活菌菌落活菌样品的稀释度将直接影响平板上的菌落数目稀释104倍稀释105倍稀释106倍稀释107倍

微生物的数量测定课本P18-191.间接计数法——稀释涂布平板法(2)计数原则:①通常选用_____________的样品液进行稀释，以保证获得菌落数为_______。②选择菌落数为的平板计数。③稀释度下，应对个平板进行重复计数，然后求出。④统计的菌落往往比活菌的实际数目。⑤统计结果一般用表示，而不是用活菌数表示。30~300同一至少3平均值少菌落数恰当的稀释度、涂布是否均匀是成功统计菌落数目的关键因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落重复实验，保证结果的准确度一定稀释范围30~300

微生物的数量测定课本P181.间接计数法——稀释涂布平板法(3)计算公式:M代表稀释倍数C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M每克样品中的菌落数＝平板上平均菌落数稀释液体积(ml)×稀释倍数

微生物的数量测定课本P181.间接计数法——稀释涂布平板法每克样品中的菌落数＝平板上平均菌落数稀释液体积(ml)×稀释倍数实例分析1：甲同学做此实验在稀释倍数105获得3个平板，菌落数分别是80、90、100，涂布平板时均使用0.1ml菌液，试计算每克土壤中可以分离尿素的细菌数目？（80+90+100）/30.1×105=9×107个

2.请计算4号试管的结果表明每克土壤中的活菌数约为个。1.1×108微生物的数量测定

微生物的数量测定课本P182.直接计数法——显微镜直接计数法利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。血细胞/细菌计数板血细胞计数板：计数相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等。细菌计数板：观察和计数细菌等较小的细胞。优点：快速、直观缺点：①不能区分死菌和活菌→统计值偏大②不适于对运动细菌的计数③个体小的细菌在显微镜下难以观察

问题2:为了避免上述缺点，我们该如何做？可以染色（如使用台盼蓝，死细胞会被染成蓝色）后再进行显微镜计数。微生物的数量测定2.直接计数法——显微镜直接计数法

血细胞计数板方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室，供计数用。中方格小方格（双线分割）大方格边长为1mm，深度为0.1mm1个计数室的体积为0.1mm3。1个计数室有400个小方格。每个小方格的体积是1/4000mm3。1mL培养液所含菌数＝每小格平均菌数×400×104×稀释倍数微生物的数量测定2.直接计数法——显微镜直接计数法

比较直接计数法与间接计数法比较项目间接计数法(稀释涂布平板法)直接计数法(显微镜直接计数法)原理当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量公式每克样品中的菌落数＝(C÷V)×MC：某稀释度下平板上生长的平均菌落数V：涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)M：稀释倍数每毫升原液所含微生物数量：每小格平均微生物数量×400×10