2024年高考生物一轮复习（全国版） 第11单元 第2课时　微生物的培养技术与应用(带解析答案).docx

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第2课时微生物的培养技术与应用

目标要求1.微生物的分离和培养。2.某种微生物数量的测定。3.培养基对微生物的选择作用。

考点一微生物的基本培养技术

1．培养基的配制

(1)概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。

(2)类型：按物理状态分类

培养基种类

特点

用途

液体培养基

不含凝固剂，呈液体状态

工业生产

固体培养基

含凝固剂(如琼脂)，呈固体状态

微生物的分离、鉴定，活菌计数，菌种保藏

(3)成分

成分

含义

作用

来源

碳源

提供碳元素的物质

构成生物体的细胞的物质和一些代谢产物，有些也是异养生物的能源物质

无机碳源：CO2、NaHCO3等；有机碳源：糖类、牛肉膏等

氮源

提供氮元素的物质

合成蛋白质、核酸等物质

无机氮源：N2、NH3、铵盐、硝酸盐等；有机氮源：蛋白胨等

无机盐

为微生物提供除碳、氮之外的各种重要元素，包括大量元素和微量元素

为微生物提供无机营养，调节培养基的pH等

无机化合物：KH2PO4、K2HPO4、NaCl等

水

生物体含量最高的无机化合物

良好的溶剂，参与化学反应等

培养基、代谢产物

特别提醒除了上述主要营养物质外，还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的需求。例如，在培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加维生素；在培养霉菌时，一般需要将培养基调至酸性；在培养细菌时，一般需要将培养基调至中性或微碱性；在培养厌氧微生物时，需要提供无氧的条件。

2．无菌技术

(1)目的：获得纯净培养物。

(2)关键：防止外来杂菌的入侵。

(3)区别：消毒与灭菌的比较

比较项目

条件

结果

常用方法

应用范围

消毒

较为温和的物理或化学方法

杀死物体表面或内部的部分微生物

煮沸消毒法

日常用品

巴氏消毒法

不耐高温的液体

化学药物消毒法

操作空间、操作者的衣物和手等

紫外线消毒法

接种室、接种箱或超净工作台

灭菌

强烈的理化因素

杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子

高压蒸汽灭菌法

培养基、容器等

干热灭菌法

玻璃器皿、金属用具等

灼烧灭菌法

接种工具等

特别提醒选择无菌技术的原则：一要考虑无菌技术的效果，灭菌的效果比消毒要好；二要考虑操作对象的承受能力，活体生物材料、操作者的手等只能采用消毒，而不能用灭菌。

3．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基

(1)计算eq\b\lc\{\rc\(\a\vs4\al\co1(①依据：配方比例,②计算：配制一定体积的培养基时，各种成分的用量))

↓

(2)称量eq\b\lc\{\rc\(\a\vs4\al\co1(①牛肉膏要放在称量纸上称量,②牛肉膏和蛋白胨都易吸潮，称取时动作要迅速，称取后及时盖上瓶盖))

↓

(3)溶化

eq\b\lc\{\rc\(\a\vs4\al\co1(①牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯，加入少量水，加热，牛肉膏溶化后取出称量纸,②加入称量好的蛋白胨和氯化钠，搅拌,③加入琼脂，加热使其熔化，并不断搅拌,④补加蒸馏水定容))

↓

(4)灭菌

eq\b\lc\{\rc\(\a\vs4\al\co1(①灭菌前：调节pH,②方法：高压蒸汽灭菌法。压力为100kPa，温度为121℃，灭菌时间为15～30min))

↓

(5)倒平板eq\b\lc\{\rc\(\a\vs4\al\co1(①倒平板应在酒精灯火焰附近,②灭菌方法是灼烧灭菌,③平板倒置操作需要等待平板冷却凝固后才能进行))

4．纯化培养

(1)方法：平板划线法和稀释涂布平板法。

(2)菌落的概念：由单个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体。

(3)平板划线法分离纯化大肠杆菌

①

接种

在装有液体培养基的三角瓶中接种大肠杆菌，在摇床上37℃下振荡培养12h

②

划线分离

用接种环在接种有大肠杆菌的三角瓶中沾取菌液一次，在固体培养基的平板上连续划线，盖好培养皿

③

培养观察

将培养皿倒置，放在37℃恒温箱中培养12～24h后，可看到划线的末端出现不连续的单个菌落

(4)稀释涂布平板法步骤

①系列稀释操作：该操作常用在将细胞接种到培养基之前，通过液体稀释的方法分散细胞，随着稀释程度的增大，单位体积中的微生物细胞数量减少，细胞得以分散。

操作步骤：

②涂布平板操作步骤

源于选修1P18“旁栏小资料”

(1)微生物的接种方法除平板划线法和稀释涂布平板法外，还包括斜面接种、穿刺接种等方法。

(2)微生物接种的核心是防止杂菌污染，保证培养物的纯度。

5．菌种的保藏方法

主要方法

临时保藏法

甘油管藏法

保藏对象

频繁使用的菌种

长期保藏的菌种

方法步骤

先接种到试管的固体斜面培养基上培养，然后放入4℃的冰箱中

转入灭菌后的甘油中，混匀后放在－20℃冷冻箱中保存

归