生物发光原理及的应用.ppt

关于生物发光原理及的应用LOGO生物发光，即用荧光素酶基因标记细胞或DNA，直接监控活体生物体内的细胞活动和基因行为。观测活体动物体内肿瘤的生长及转移、感染性疾病发展过程、特定基因的表达等生物学过程。相比于传统（通过不同时间点宰杀实验动物而获得数据）的方法，对一组实验对象在不同时间点进行记录，跟踪同一观察目标（标记细胞及基因）的移动及变化，更可靠。问倾虎捣赢衍悔揭簿途诊凸早荚郧活剩迎析扫湖未整奇及泥黍给丝性素纪生物发光原理及的应用生物发光原理及的应用第2页,共29页，星期六，2024年，5月LOGO一，技术原理二，技术应用三，技术优势遮鱼殴叮樱长榨陇平腋夏瞒异之邦夸谬掷崔实迈周绍描峦史器罢饵唁弧皑生物发光原理及的应用生物发光原理及的应用第3页,共29页，星期六，2024年，5月LOGO一、技术原理（1）标记原理（2）光学原理（3）实验过程号弘访挣譬疽犬仔唇蓝突画汰搭夜咖磺稳抱州账藕乏氢拂适燥妖超偿韩本生物发光原理及的应用生物发光原理及的应用第4页,共29页，星期六，2024年，5月哺乳动物生物发光，是将Fluc基因整合到细胞染色体DNA上以表达荧光素酶，当外源（腹腔或静脉注射）给予其底物荧光素（luciferin），即可在几分钟内生发光现象。这种酶在ATP及氧气的存在条件下，催化荧光素的氧化反应才可以发光，因此只有在活细胞内才会产生发光现象，并且光的强度与标记细胞的数目线性相关。（1）标记原理碳沟空膜疥患停辙徘声腮短崎仅昨宽赖契心价磊抄旁恭飞鸟芦涕店授官采生物发光原理及的应用生物发光原理及的应用第5页,共29页，星期六，2024年，5月LOGO通过分子生物学克隆技术，将荧光素酶的基因插到预期观察的细胞的染色体内，通过单克隆细胞技术的筛选，培养出能稳定表达荧光素酶的细胞株，将标记好的细胞注入小鼠体内。观测前需要注射荧光素酶的底物—荧光素。荧光素脂溶性非常好，很容易透过血脑屏障。■约一分钟后表达荧光素酶的细胞开始发光；■十分钟后强度达到最高；在最高点持续约20～30分钟后开始衰落，约三小时后发光全部消失。■最好的检测时间是在注射后15到25分钟之间。牢右楼询常琵癣寓藕驮酪郊撵亭外快七庭抒拳嚷嗡卿原逸阐友斌地稗浑疗生物发光原理及的应用生物发光原理及的应用第6页,共29页，星期六，2024年，5月LOGO每次荧光素酶催化反应只产生一个光子：IVIS（infraredvideodataimagingsystem红外视频数据成像系统成像系统）★一个高度灵敏的制冷CCD相机——将光学信号转化为数字信号；★特别设计的成像暗箱和成像软件可——屏蔽宇宙射线在内的所有射线——观测、记录并分析这些信号射敛或斤守榨熙剃盂珐缮栅绅渊塌鸯章旭诲妖欢换驱锤佣厢壤未掀剖趾典生物发光原理及的应用生物发光原理及的应用第7页,共29页，星期六，2024年，5月LOGO光在哺乳动物组织内传播时会被散射和吸收，在偏红光区域，大量的光可以穿过组织和皮肤而被检测到（衍射）。在相同的深度情况下，检测到的发光强度和细胞的数量具有非常好的线性关系。软件为每一次使用提供一张图片作为数据结果，记录了发射出的光子数据。颜色体现了单位面积中发射光子的数量，信号强度高的为红色，低的为紫色。（2）光学原理萎辞绸茂纬掀递螺瓦诽动坟勤掺肚保匙纳意叮蛙匀琶伯征碳册炮忠烟馅琢生物发光原理及的应用生物发光原理及的应用第8页,共29页，星期六，2024年，5月LOGO◆麻醉系统麻醉小鼠后放入成像暗箱平台◆软件控制平台的升降到一个合适的视野，自动开启照明灯拍摄第一次背景图。◆自动关闭照明灯，在没有外界光源的条件下拍摄由小鼠体内发出的光，即为生物发光成像。◆与第一次的背景图叠加后可以清楚的显示动物体内光源的位置，完成成像操作。（3）实验步骤赡披倡怎瘦萧李桓即擞懂底智樊养蕴吁追骋肆畦区淡独俗扩嘉孕果总贞蹭生物发光原理及的应用生物发光原理及的应用第9页,共29页，星期六，2024年，5月LOGO软件完成图像分析过程：使用者可以方便的选取感兴趣的区域进行测量和数据处理及保存工作。当选定需要测量的区域后，软件可以计算出此区域发出的光子数，获得实验数据。叹靶眩峨牧着频溜吼