特殊显微镜结构及操作技术.ppt

第31页,共48页，星期六，2024年，5月10.更换样品利用显微镜主体上的“物镜再聚焦定位环”，照明器上的“倾斜装置”，“聚光器再聚焦指紧螺钉，可容易更换样品。第32页,共48页，星期六，2024年，5月11.显微镜操作结束后1)关闭电源开关(开关拨至O)2)灯室冷却后，把显微镜上的聚乙烯防尘罩盖好。第33页,共48页，星期六，2024年，5月相差（PH）显微术观察透明细胞或其他透明样品，需配相衬聚光器、相衬物镜、相衬环等附件。相衬板将衍射光推迟1/4波长，振幅相减，样品暗，背景亮，称正反差或暗反差，分正低（DL）、正低低（DLL）和中型暗相差（DM）。折光率较强的样品用后者。相衬板将直射光推迟1/4波长，振幅相加，样品亮，背景暗，称负反差或明反差，分负中（NM）和负高（NH）。折光率较小的样品用后者。第34页,共48页，星期六，2024年，5月关键点：将有ph标记的物镜与物镜相同ph标记的聚光器模块一起送入光路，在进行显微术前，校正(对中)物镜里的相差板及聚光器模块里的环形光阑。第35页,共48页，星期六，2024年，5月1.用明视场（BF）显微术对样品聚焦。

2.相差观察时对显微镜的调整。1)将ph物镜转入光路。2)转动“聚光器转盘”，使其与在光路中的物镜(步骤1中所安置的)具有相同的ph标记。3)向右转动聚光器上的“孔径光阑调节杆”，完全打开孔径光阑。第36页,共48页，星期六，2024年，5月第37页,共48页，星期六，2024年，5月3.对中环形光阑1)把“目镜筒转盘”设到B位置，转动勃氏镜聚焦螺钉，使环形光阑像清晰。2)用六角起子转动聚光器模块中的两个“环形光阑对中螺钉”，使环形光阑像与物镜中的相差板环形像同心。3)把目镜筒转盘位置再转到O上。调中心手轮第38页,共48页，星期六，2024年，5月第39页,共48页，星期六，2024年，5月4.进行观察1)把聚光器“孔径光阑”完全打开。2)移动透射照明器上的“视场光阑调节杆”，使视场光阑像大小与视场大小接近。3)把透射照明器上的“NCB11滤色片”从光路中移开，把“GIF滤色片”移进光路。(提高反差)4)可通过把“ND滤色片”移进或移出光路来调节视场亮度。第40页,共48页，星期六，2024年，5月第41页,共48页，星期六，2024年，5月5.使用不同放大倍数的物镜进行观察1)把所需放大倍数的相差物镜移入光路。2)转动“聚光器转盘”，使其与在光路上物镜（步骤1中所安置的）具有相同的ph标记。3)调节放入光路中的环形光阑中心。(见程序3)第42页,共48页，星期六，2024年，5月6.更换样品利用使用显微镜主机上的“物镜再聚焦定位环”，透射照明器上的“倾斜”装置及“聚光器再聚焦指紧螺钉”，可容易更换样品。7.显微镜操作结束后与明视场显微术步骤相同。第43页,共48页，星期六，2024年，5月微分干涉（DIC）显微术可观察到样品的立体感，适用于显微操纵等，彩色图像。因塑料培养皿的不均衡张力在DIC下呈现干涉条纹、DIC不宜用于普遍使用的塑料培养皿。DIC的光通亮大，可用到100倍物镜。需配DIC聚光器等附件，使用明场物镜。1．用明场找到视野2．压入起偏器，选择相应模块3．调节孔径光栅至最佳效果。第44页,共48页，星期六，2024年，5月荧光（E）显微术适用于本身属于或被染色后形成荧光体的样品。荧光体在一定波长光（紫外或可见）的激发下发光（即荧光，波长长于激发光）。需配荧光附件和滤光器等。前者主件为激发光源，一般分汞灯系统和卤灯系统，汞灯既适用于紫外光激发也适用于可见光激发，且能量较高；后者只适用于可见光激发。（此处插入拍摄图片）第45页,共48页，星期六，2024年，5月1.操作之前要求：（1）检查荧光装置的工作时间，如荧光灯的工作时间超过使用寿命，应予以更换。（2）使用物荧光载波片（3）每次使用之间必须间隔20分钟。第46页,共48页，星期六，2024年，5月2.用明场找到视野。3.关闭明场光源，打开荧光电源预热5分钟。4.开启荧光盘，并根据要求选择荧光通道。5.激发荧光发生器，打开光闸，即可进行观察。第47页,共48页，星期六，2024年，5月感谢大家观看第48页,共48页，星期六，2024年，5月关于特殊显微镜结构及操作技术【实验用品】1．试剂：10μg/mL罗丹明123的磷酸缓冲液（PBS）荧光染料。2．器材：倒置显微镜，相差显微镜附件（相差物镜、转盘聚光器、对中环形光阑和绿色滤色镜等），微分干涉显微镜附件（起偏镜、检偏镜和渥拉斯顿棱镜等