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7高效液相色谱技术（HPLC）

高效液相色谱（HPLC：HighPerformanceLiquidChromatography）是化学、生物化

学与分子生物学、医药学、农业、环保、商检、药检、法检等学科领域与专业最为重要的

分离分析技术，是分析化学家、生物化学家等用以解决他们面临的各种实际分离分析课题

必不可缺少的工具。国际市场调查表明，高效液相色谱仪在分析仪器销售市场中占有最大

的份额，增长速度最快。

高效液相色谱的优点是：检测的分辨率和灵敏度高，分析速度快，重复性好，定量精

度高，应用范围广。适用于分析高沸点、大分子、强极性、热稳定性差的化合物。其缺点

是：价格昂贵，要用各种填料柱，容量小，分析生物大分子和无机离子困难，流动相消耗

大且有毒性的居多。目前的发展趋势是向生物化学和药物分析及制备型倾斜。

7.1基本原理

加样流动相固定相流动相

AA

BC

BC

B

A

固定相——柱内填料，流动相——洗脱剂。

HPLC是利用样品中的溶质在固定相和流动相之间分配系数的不同，进行连续的无数

次的交换和分配而达到分离的过程。

通常，按溶质（样品）在两相分离过程的物理化学性质可以作如下的分类：

分配色谱：——分配系数

亲和色谱：——亲和力

吸附色谱：——吸附力

离子交换色谱：——离子交换能力

凝胶色谱（体积排阻色谱）：——分子大小而引起的体积排阻

分配色谱又可分为：

正相色谱：固定相为极性，流动相为非极性。

反相色谱：固定相为非极性，流动相为极性。用的最多，约占60～70％。

固定相（柱填料）：

固定相又分为两类，一类是使用最多的微粒硅胶，另一类是使用较少的高分子微球。

后者的优点是强度大、化学惰性，使用pH范围大，pH1～14，缺点是柱效较小，常用于

离子交换色谱和凝胶色谱。

最常使用的全孔微粒硅胶（3～10μm）是化学键合相硅胶，这种固定相要占所有柱

填料的80％。它是通过化学反应把某种适当的化学官能团（例如各种有机硅烷），键合到

硅胶表面上，取代了羟基（－OH）而成。它是近代高效液相色谱技术中最重要的柱填料

类型。

使用微粒硅胶要特别注意它的使用pH范围是2～7.5，若过碱（＞pH7.5），硅胶会粉

碎或溶解；若过酸（＜pH2），键合相的化学键会断裂。

键合相使用硅胶作基质的优点是：①硅胶的强度大；②微粒硅胶的了孔结构和表面积

易人为控制。③化学稳定性好。

硅胶(SiO•nHO)：OHOH

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—Si—O—Si—

重要的键合相是：硅烷化键合相，它是硅胶与有机硅烷反应的产物。

最常用的键合相键型是：

—Si—O—Si—C

R1R1

—Si—OH+X—Si—R—Si—O—Si—R+HX

R2R2

硅胶有机硅烷键合相

X━Cl，CHO，CHO等。

325

R━烷：CH（即C8填料），CH，CH等。

81710211837

R、R━X、C