N-芴甲氧羰基-N(im)-三苯甲基-组氨酸.docxVIP

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N-芴甲氧羰基-N(im)-三苯甲基-组氨酸范围

1范围

本文件规定了N-芴甲氧羰基-N(im)-三苯甲基-组氨酸的技术要求、试验方法、检验规则、标志、包装、运输、贮存、有效期。

本文件适用于多肽药物固相合成中使用的N-芴甲氧羰基-N(im)-三苯甲基-组氨酸。

分子式：C40H33N3O4

结构式：

相对分子量：619.71（按2019年国际相对原子质量）

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T191包装储运图示标志

《药品生产质量管理规范》

3术语和定义

本文件无术语和定义。

4技术要求

应符合表1的要求。

2

表1技术要求

项目

要求

外观

白色至类白色粉末

溶解性

1mmol在2mlDMF中溶解后应澄清透明

鉴别（IR）

供试品的红外光吸收图谱应与结构式一致

纯度（HPLC）

≥98.0%

H-His-OH(TLC)

≤0.1%

H-His(Trt)-OH(TLC)

≤0.1%

异构体(Fmoc-D-His(Trt)-OH)（HPLC）

≤0.2%

水分（KF)

≤1.0%

比旋光度[20/D]

+84.0°±8.0°（c=1，CHCl3）

含量（滴定）

≥98.0%

5试验方法

本试验所用试剂和水除特殊注明外，均为分析纯试剂和纯化水。

5.1外观

采用目视法测定。

5.2溶解性

5.2.1仪器

50ml具塞比色管。

5.2.2试剂

DMF。

5.2.3操作方法

称取本品约6.2g，置于一个干燥洁净的50ml具塞比色管中，加DMF20ml，超声溶解后应澄清透

明。

5.3鉴别（IR）

5.3.1仪器

3

红外光谱仪、电子天平。

5.3.2测定方法

取供试品适量，按照红外光谱仪操作规程进行测定，本品的红外光吸收图谱应与结构式一致。

5.4纯度（HPLC）

5.4.1仪器

高效液相色谱仪、电子天平。

5.4.2试剂

乙腈（色谱级）、甲醇（色谱级）、三氟醋酸、高纯水。

5.4.3色谱条件

色谱条件应符合表2的要求。

表2色谱条件

设定参数

设定值

色谱柱

型号：ZORBAXSB-C18（或等效的色谱柱）

规格：4.6mm*25cm，5um

流动相

A：0.1%三氟醋酸-水（v/v）

B：0.1%三氟醋酸-乙腈（v/v）

洗脱方式

梯度

流速

1.0ml/min

进样体积

20μl

柱温

20℃（注意：柱温必须20℃,超过20℃产品会分解）

检测波长

220nm

运行时间

35min

稀释剂

乙腈

供试品浓度

0.5mg/ml

梯度洗脱方案应符合表3要求。

4

表3梯度洗脱方案

时间（min）

流动相A（%）

流动相B（%）

0

70

30

20

10

90

25

10

90

26

70

30

30

70

30

保留时间应参考表4。

表4保留时间

品名

保留时间（min)

相对保留时间

备注

乙酸乙酯

6.116

0.37±0.01

溶剂

H-His(Trt)-OH

6.635

0.40±0.01

杂质

Fmoc-His-OH

7.551

0.45±0.01

杂质

Fmoc-β-Ala-OH

11.836

0.71±0.01

杂质

Fmoc-OH

12.865

0.77±0.01

杂质

Fmoc-β-Ala-His(Trt)-OH

15.744

0.94±0.01

杂质

Fmoc-Osu

15.876

0.95±0.01

杂质

Fmoc-His(Trt)-OH

16.753

1.00

主峰

Trt-OH

18.368

1.10±0.01

杂质

Fmoc-His(Trt)-His(Trt)-OH

20.602

1.23±0.01

杂质

5.4.4试验步骤

供试品溶液的配制

取本品约50mg，精密称定，置于100ml的容量瓶中，用适量稀释剂溶解后定容至刻度，摇匀即可。

测定

分别进稀释剂空白和供试品溶液各1针，按照5.4.3的色谱条件进行测定。

5.4.5定量方法

以峰面积归一化法计算纯度和杂质。

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5.5H-His-OH(TLC)

5.5.1仪器

硅胶G薄层板、层析缸。

5.5.2试剂

正丁醇、冰醋酸、DMF、茚三酮、2%茚三酮乙醇溶液。

5.5.3分析步骤

对照品溶液的配制

取H-His-OH约0.01g，精密称定，置于10