DB15T 3747-2024羊布鲁氏菌免疫抗体(M5-90Δ26 株)与感染抗体鉴别检测 ELISA 法.docxVIP

ICS65.020.30

15

CCSB41

内蒙古自治区地方标准

DB15/T3747—2024

羊布鲁氏菌免疫抗体(M5-90Δ26株)与

感染抗体鉴别检测ELISA法

ELISAmethodfordistinguishingm5-90Δ26vaccinatedantibodiesfrom

wild-typebrucellaInfectedantibodiesinsheepandgoat

2024-11-29发布

2024-12-29实施

内蒙古自治区市场监督管理局发布

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。

本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（SAM/TC19）归口。

本文件起草单位：内蒙古自治区动物疫病预防控制中心、内蒙古金迈诗生物科技有限公司。

本文件起草人：郭宇、王建龙、陈君彦、萨茹拉、张璇、高登军、庄金山、王旭红、武琥琮、苏胜

杰、特木尔巴根、马立峰、郝剑锋、陈焱。

羊布鲁氏菌免疫抗体(M5-90Δ26株)与

感染抗体鉴别检测ELISA法

1范围

本文件规定了仅免疫羊布鲁氏菌基因缺失活疫苗（M5-90Δ26株）免疫抗体与感染抗体鉴别检测

ELISA方法。

本文件适用于仅免疫羊布鲁氏菌基因缺失活疫苗（M5-90Δ26株）免疫抗体与感染抗体的鉴别检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T18646-2018动物布鲁氏菌病诊断技术

GB19489实验室生物安全通用要求

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

ELISA酶联免疫吸附试验（Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay）

HRP辣根过氧化物酶（HorseradishPeroxidase）

TMB3,3,5,5-四甲基联苯胺（Tetramethylbenzidine）

PBS磷酸盐缓冲液（PhosphateBufferedSaline）

OD光密度（OpticalDensity）

PCR聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）

DNA脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleicacid）

BCA聚氰基丙烯酸正丁酯（BicinchoninicAcid）

5仪器和设备

酶标仪（含有450nm滤光片）。

洗板机。

恒温培养箱（37℃）。

离心机。

冰箱（4℃，－20℃）。

旋涡振荡器。

可调微量移液器（量程为1μL～10μL、10μL～100μL、20μL～200μL、30μL～300μL和100

μL～1000μL等）。

6试剂和材料

除另有规定外，所有试剂均为分析纯的生化试剂，实验室用水应符合GB/T6682的规定。

包被抗原按照附录A中A.1配制。

抗原包被缓冲液按照附录A中A.2配制。

PBS（0.01mol/L，pH值7.4）按照附录A中A.3配制。

封闭液按照附录A中A.4配制。

20倍浓缩洗涤液按照附录A中A.5配制。

样品稀释液按照附录A中A.6配制。

阳性对照按照附录A中A.7配制。

阴性对照按照附录A中A.8配制。

酶结合物按照附录A中A.9配制。

TMB显色液商品化产品。

终止液按照附录A中A.10配制。

96孔酶标板。

血清稀释板。

封板膜。

移液器相匹配的吸头。

商品化试剂盒（可以选择）。

7样品采集、保存与运输

样品采集

按照NY/T541执行，按常规方法采血，采血管室温（18℃～25℃）下倾斜30°静置2h～4h，待

血液凝固有血清析出时，置4℃冰箱过夜，待大部分血清析出即为待检血清，必要时可低速离心（1000

r/min离心10min～15min），收集血清。样品采集生物安全规范应符合GB19489规定。

样品保存

血清样品若在一周内进行检测，则置于4℃冰箱保存备用。血清样品若超过一周检测，则置于－

20℃保存备用。

样品运输

血清样品若12h内运达实验室，在保温箱内加冰袋运输。若超过12h后运输，血清样品应先冷冻

（－20℃）后，在保温箱内加大