大肠杆菌感受态制备及转化.ppt

实验一

大肠杆菌感受态制备及外源DNA的转化了解转化的概念及其在分子生物学研究中的意义。0102学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞的方法。03学习将外源质粒DNA转入受体菌细胞并筛选转化体的方法。实验目的实验原理转化(Transformation)是将异源DNA分子引入另一细胞品系，使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段，它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究的基本实验技术。转化中的受体细胞转化过程所用的受体细胞一般是限制性修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变株，常用的变异株（受体细胞）有DH5α,top10,JM109等细胞转化方法：电击法、CaCl2、RuCl等化学试剂法01感受态细胞：经处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许外源DNA分子通过时细胞的状态。02转化细胞(转化子)：带有异源DNA分子的受体细胞(Transformant)。03实验原理实验原理本实验以E.coliDH5α菌株为受体细胞，用CaCl2处理受体菌使其处于为感受态，然后与pCT74质粒共保温，实现转化。pCT74质粒携带有抗氨苄青霉素的基因，因而使接受了该质粒的受体菌具有抗氨苄青霉的特性，用Apr符号表示。将经过转化后的全部受体细胞经过适应稀释，在含氨苄青霉素的平板培养基上培养，只有转化体才能存活，而未受转化的受体细胞则因无抵抗氨苄青霉素的能力而死亡。AmpR01抗Amp02宿主细菌03含Amp培养基细胞生长状态和密度。转化的质粒DNA的质量和浓度。试剂的质量。防止杂菌和其它外源DNA的污染。影响转化率的因素实验仪器超净工作台离心设备台式高速冷冻离心机恒温空气摇床恒温培养箱培养皿肠杆菌DH5α壹贰B培养基，叁mol/LCaCl2溶液（预冷）肆苄青霉素伍pCT74质粒实验试剂菌株活化感受态细胞制备外源DNA的转化实验步骤