《HPLC和CE衍生试剂》课件.pptVIP

*****************课程目标掌握HPLC原理了解高效液相色谱法的基本原理和操作方法。了解CE原理理解毛细管电泳法的基本原理和操作步骤。掌握衍生化原理学习HPLC和CE中衍生化的目的、原理和方法。了解衍生试剂应用熟悉常用衍生试剂的种类、性质和应用场景。前言高效液相色谱法(HPLC)和毛细管电泳(CE)是两种广泛应用于生物化学、医药、食品安全等领域的分析方法。HPLC和CE技术发展迅速，衍生化技术在其中发挥着重要作用。衍生化技术可以提高分析物的灵敏度、选择性和分离度，为复杂体系分析提供更可靠的数据。1.高效液相色谱法(HPLC)高效液相色谱法(HPLC)是一种强大的分离和分析技术，广泛应用于各种领域，包括医药、化学、食品、环境等。HPLC使用高压泵将流动相推动通过装有固定相的色谱柱，分离样品中的不同组分，最终通过检测器检测并记录各组分的信号。HPLC的原理11.固液分离HPLC采用固定相和流动相，利用不同物质对两相的亲和力差异实现分离。22.流动相输送高压输送流动相，使样品快速通过色谱柱，提高分离效率。33.检测器检测检测器根据物质的光学、电学、物理性质差异进行定性和定量分析。HPLC系统组成泵提供高压推动流动相进样器将样品注入色谱柱色谱柱分离样品组分检测器检测流出组分数据处理系统记录和分析数据HPLC分析的优缺点优点HPLC灵敏度高，可以检测痕量物质。HPLC方法重现性好，可重复性高。HPLC应用范围广，可分析各种化合物。HPLC操作简单，易于实现自动化。缺点HPLC仪器价格昂贵，维护成本高。HPLC分析时间较长，效率较低。HPLC样品前处理复杂，操作繁琐。HPLC方法开发难度较高，需要专业知识和经验。HPLC样品预处理HPLC样品预处理是HPLC分析的关键步骤之一，目的是去除样品中的杂质，提高分析结果的准确性和重现性。1样品溶解将样品溶解在合适的溶剂中，确保样品完全溶解并能被HPLC系统进样。2过滤使用微孔滤膜去除样品中的颗粒物，避免堵塞HPLC系统。3萃取使用合适的萃取剂将目标化合物从样品基质中分离出来，提高目标化合物的浓度。4衍生化将目标化合物转化为易于检测的衍生物，提高分析灵敏度和选择性。样品预处理方法的选择取决于样品的性质和分析目标。合适的预处理方法可以提高HPLC分析结果的准确性和可靠性。HPLC衍生化提高检测灵敏度许多分析物在HPLC中缺乏紫外吸收或荧光，通过衍生化，可以引入新的发色团或荧光团，增强其在检测器中的响应信号。改善分离效果通过衍生化，可以改变分析物的极性、挥发性或疏水性，从而改善其在色谱柱上的分离效果，提高分析的准确性。扩展HPLC应用范围衍生化技术能够将一些原本难以分析的物质转化为可检测的化合物，扩展了HPLC在不同领域中的应用，例如糖类分析、氨基酸分析等。2.毛细管电泳(CE)毛细管电泳(CE)是一种高效分离技术，用于分析生物样品中的各种分子，如蛋白质、肽、核酸和药物。CE的原理电场力毛细管电泳利用电场力驱动带电荷的分析物在毛细管中迁移。缓冲溶液使用缓冲溶液控制毛细管内溶液的pH值，以确保分析物以最佳状态迁移。电泳分析物在毛细管内根据其电荷和质量大小的不同，以不同的速度迁移，从而实现分离。检测器检测器用于检测迁移到毛细管末端的分析物，并记录其浓度。CE系统组成毛细管电泳(CE)是一种基于电泳分离技术的高效分离分析方法。CE系统主要由以下几个部分组成：毛细管高压电源检测器进样系统数据处理系统CE分析的优缺点优点高分辨率高灵敏度分析速度快样品用量少缺点适用范围有限对样品纯度要求高仪器维护较为复杂CE样品预处理样品溶解选择合适的溶剂溶解样品，确保样品完全溶解并保持其稳定性。过滤使用合适的滤膜过滤样品，去除样品中可能存在的颗粒物，防止堵塞毛细管。稀释将样品稀释至合适的浓度，保证样品在毛细管中能够得到良好的分离。衍生化根据分析目标物的性质选择合适的衍生试剂进行衍生化，提高目标物的检测灵敏度。CE衍生化提高检测灵敏度通过衍生化反应，将分析物转化为具有更高摩尔吸光系数或更强荧光的衍生物，从而提高检测灵敏度。改善分离效果衍生化可以改变分析物的极性，使其更容易被电泳分离，从而改善分离效果。提高分析物稳定性一些分析物在电泳条件下不稳定，衍生化可以提高其稳定性，延长分析时间。增加分析物识别方法衍生化可以改变分析物的物理化学性质，使其更容易被检测器识别，从而增加分析物识别方法。HPLC和CE衍生试剂衍生化