人用狂犬病疫苗的免疫机制、毒株及质量标准分析-重庆狂犬疫苗抗体检测.pdfVIP

人用狂犬病疫苗的免疫机制、毒株及质量标准分析

一、人用狂犬病疫苗的免疫机制、毒株及质量标准

狂犬病病毒RNA编码核蛋白（N）、M1、M2、病毒包膜糖蛋白（G）

和L五种蛋白，其中G蛋白是狂犬病病毒最主要的抗原，可有效刺激

特异性辅助性T细胞和细胞毒性T细胞（CTL）增生，并诱导机体产生

特异性抗体。G蛋白特异性抗体是狂犬病疫苗最重要的保护性抗体，免

疫效果主要依赖其抗原表位、结构、蛋白折叠及糖基化等。N蛋白也是

一种有效的保护性抗原，能够刺激B细胞和Th细胞诱导产生细胞和体

液免疫。磷蛋白（P）可诱导CTL，但保护作用较弱。机体在接种狂犬

病疫苗约7天左右产生IgM抗体，在约14天后产生IgG抗体并迅速升

高。IgM和IgG抗体均具有中和病毒的能力，有些中和抗体能进入感染

狂犬病病毒的神经细胞内抑制病毒复制。CTL的高峰出现在免疫后12

天，可清除中枢神经系统内的狂犬病病毒，Th细胞可增强抗核蛋白和

糖蛋白抗体，也能增加保护效果。但Suss的研究认为细胞免疫在狂犬

病中的作用不明。

由于狂犬病病毒核蛋白序列高度保守，氨基酸同源性达78%至93%，

故病毒之间在核壳体水平上存在着广泛的抗原交叉反应。狂犬病病毒

的主要抗原部位为G蛋白外功能区，当其氨基酸同源性74%时，病毒

之间能够交叉中和，为同一遗传谱系内的病毒；膜外区的氨基酸同源

性62%时，则无交叉中和反应。目前疫苗株均属于遗传谱系I，对遗传

谱系II中的病毒感染不具保护作用。

现已经有十余个种类或基因型的狂犬病病毒属病毒被描述为狂犬

病的病原体。目前为止，遗传谱系I的狂犬病病毒是引起人狂犬病的

最常见的病毒型别，也是至今应用于狂犬病疫苗生产的唯一病毒种类。

故现有疫苗可能无法为遗传谱系I外的其他血清型病毒感染提供保护。

因此，用于疫苗的病毒种类必须慎重选择。生产用毒种应是在实验室

细胞培养适应和减毒，并具有稳定生物学特性的固定毒株，其历史和

来源应确证清楚，并经过全面的特征性检定，符合国家相关文件的要

求。病毒灭活后制成的疫苗对人体安全且能产生有效的免疫保护作用。

WHO推荐用于疫苗生产的病毒固定毒株包括PasteurVirus、Pitman-

Moore、Vnukovo-32、Flury鸡胚细胞低传代株和CTN株等。

人用狂犬病疫苗应符合WHO生物制品标准专家委员会（ECBS）制

定的指导原则中对疫苗特性、生产及质量控制的要求。用于制备疫苗

的细胞基质应来源于健康动物，动物来源品系清楚。根据现行《中国

药典》的要求，动物必须是清洁级或以上的动物。所用动物应符合实

验动物微生物学和寄生虫学检测要求的相关规定。人二倍体及传代细

胞应在限定代次内使用。病毒在细胞（或胚蛋）中增殖后，将收获的

病毒进行浓缩、纯化、灭活，加入保护剂冻干而成。细胞培养疫苗的

最低效价为在效期内每一剂肌注剂量达2．5IU以上，由NIH法检测确

定。ELISA法检测糖蛋白等其他体外测定方法目前仍处于实验室验证阶

段，但该方法已用于生产过程中抗原含量的控制。疫苗需经临床前研

究及临床试验，企业需获得国家食品药品监督管理总局批准的生产许

可证方可生产疫苗。WHO建议对新申请注册的疫苗，在临床试验中检测

0、14、28/30、180、360天血清中和抗体水平。已经获准生产的人用

狂犬病疫苗需按照国家食品药品监督管理总局的要求申请批签发，仅

有获得批签发合格证的狂犬病疫苗批次方可上市使用。分析

二、中国动物狂犬病现状

在2004年至2018年期间，科研人员从17个省的185只疑似狂犬

病动物中收集了动物脑组织，FAT（directfluorescentantibodytext

（FAT），直接荧光抗体检测）检测后发现其中有144株（77．8％）

为狂犬病病毒阳性样品。在阳性物种中，狗是主要感染动物，占总病

例数的68．8％（99/144），其次是牛（12．5％），绵羊（9．7％），

骆驼（4．2％），狐狸（2．1％），猪（1．4％），（0．7％）和驴

（0．7％）。同时，研究人员在对中国7个省的健康犬进行主动监测

的10，118个脑组织样本中，有33个（0．33％）呈FAT阳性。在33

份阳性样本中，有31份来自随机检测狗和