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*概念:可溶性Ag与相应Ab特异性结合,在适当条件下出现的沉淀现象。
AgAb反应最适比例的基本滴定方法*海藻中提取的多聚半乳糖类,具有三维空间多孔网状结构,配成1%--2%浓度,98%以上的水分,加热使其充分溶胀,温度大于50℃时,液体状态存在,45℃,固相状态存在,凝胶分子形成网络,将水分子固相化---固相液体,AgAb在此凝胶中扩散,犹如在液体中自由泳动,大分子物质扩散慢。
琼脂网孔有一定的限度,AgAb形成复合物后,大分子被网络在琼脂中
可溶性Ag与相应Ab在凝胶中扩散,形成浓度梯度,在Ag与Ab浓度比例恰当的位置形成肉眼可见的沉淀线或沉淀环
*可根据沉淀线的位置、形状及对比关系,可对Ag、Ab进行定性分析。*(单向辐射状免疫扩散:SRID)沉淀环的直径或面积与Ag量成正相关大分子Ag、长时间扩散(》48h)Mancini曲线C/d2=K本试验为一定量试验,将一定量抗体均匀混入琼脂中倾注于玻片上,待凝固后打孔,将抗原加入孔内,抗原由圆孔中央向四周扩散,若遇相应抗体便发生特异性结合,在二者比例合适处围绕孔的周围形成乳白色的沉淀环,环的大小与抗原含量成正比,因此事先用不同浓度的已知抗原做实验绘制标准曲线,利用标准曲线便可求出未知抗原的含量(本实验以IgG定量测定为例)。*按纸样用打孔器打孔:孔距1.2~1.5厘米,两排距离2厘米。*如果沉淀条纹不清晰,于37℃保温数小时可增强沉淀条纹的清晰度。Experiment2PrecipitationSolubleAg+Ab→Ag-AbcomplexDefinition:PrecipitationreactioninsolutionPrecipitationreactioningelsImmunoelectrophoresisTechniqueImmunoturbidimetryClassification:PrecipitationReactionsInGelsAgar、AgarosePrecipitationreactionsbetweensolubleantigensandantibodiescantakeplaceinsemisolidmediasuchasagargels.Whensolubleantigenandantibodiesareplacedinwellscutinthegel,thereactantsdiffuseinthegelandformgradientsofconcentration,withthehighestconcentrationsclosesttothewells.Somewherebetweenthetwowells,thereactingantigenandantibodieswillbepresentatproportionsthatareoptimalforformationofaprecipitate.DoubleAgarDiffusionTestanalysisofthepropertiesofAgPatternsofIdentityPatternsofNonidentityPatternsofPartialIdentity:spursingleagardiffusiontestThewellscontainantigenatdifferentconcentrations,whiletheantibodiesaredistributeduniformlyintheagargel.Thus,theprecipitinlineisreplacedbyaprecipitinringaroundthewell.Thedistancetheprecipitinringmigratesfromthecenteroftheantigenwellisdirectlyproportionaltotheconcentrationofantigeninthewell.MethodResultCounterImmunoelectrophoresispH8~8.6bufferAg:PI=5MW:smallElectricfieldforce:cathode→anode,strongElectroos
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