流式细胞分析.ppt

*FluorescenceFALSSensorFluorescencedetector第31页,共54页，星期六，2024年，5月*PMTPMTPMTPMTDichroicFiltersBandpassFiltersExampleChannelLayoutforLaser-basedFlowCytometryLaser1234Flowcell第32页,共54页，星期六，2024年，5月*台式机通常配有两根激光器：第一根激光器波长为488nm。第二根为波长635nm的红二极管固态激光器。第33页,共54页，星期六，2024年，5月*数据分析

第34页,共54页，星期六，2024年，5月*ImmunophenotypingCD2CD4第35页,共54页，星期六，2024年，5月*设门通过设门的方法可以定义细胞亚群的区域。如：血样本是混合细胞群，如果想单独分析淋巴球细胞，可根据FSC或细胞大小，在FSC，SSC的散点图中设门，其数据结果只反映淋巴细胞亚群的荧光特性。第36页,共54页，星期六，2024年，5月*第37页,共54页，星期六，2024年，5月*直方图可直观单个参数的细胞数量。阴性对照用于决定直方图中单参数的左右边界。左图中M1为阴性对照峰。右图中M2为CD3FITC阳性峰。第38页,共54页，星期六，2024年，5月*第39页,共54页，星期六，2024年，5月*统计结果表明，整个事件共记录了6000个细胞，门内淋巴细胞2891个。其中M1（阴性）细胞619个，M2（CD3阳性）细胞2272个细胞。淋巴细胞亚群CD3阳性百分含量的统计结果为：M2：2272/2891=78.59%。第40页,共54页，星期六，2024年，5月*二维点图以双参数显示结果，每个点表示一个或多个细胞。图为阴性对照图，用于设定阴性对照边界，全图划分为四个象限，以区分阴性细胞、单阳性细胞以及双阳性细胞。左下象限（LL）为双阴性细胞，左上象限（UL）为Y轴阳性细胞（CD19PE），右下象限（LR）为X轴阳性细胞（CD3FITC），右上象限（UR）为双阳性细胞（CD19+/CD3+）。第41页,共54页，星期六，2024年，5月*如图5-7所示，淋巴细胞亚群双阳性细胞（CD19+/CD3+）的百分含量为：296/2839=10.43%。第42页,共54页，星期六，2024年，5月*分选

第43页,共54页，星期六，2024年，5月*488nmlaser+-ChargedPlatesSinglecellssortedintotesttubesFALSSensorFluorescencedetectorPurdueUniversityCytometryLaboratories第44页,共54页，星期六，2024年，5月*流式细胞术的临床应用

第45页,共54页，星期六，2024年，5月*1.检测淋巴细胞亚群，监测细胞免疫状态2.白血病/淋巴瘤免疫分型3.HLA组织配型及HLA与某些疾病的关系4.干祖细胞的定量及成分分析.5.其它:血小板PAIg：粘附分子;TCR多态性检测;肿瘤癌基因及抑癌基因蛋白产物的检测;细胞内酶;耐药蛋白的分析等等。临床常见应用第46页,共54页，星期六，2024年，5月*HLA-B27检测外周血HLAB27的表达及其表达程度与强直性脊柱炎的发生有很大程度的相关性.循环血中活化血小板（CD62P、CD63）：糖尿病伴微血管病变、冠心病、高血压病、高脂血症、脑血栓形成、短暂性脑缺血发作、脑动脉硬化患者活化血小板百分率和绝对值显著高于正常人。而糖尿病无微血管病变、周围血管病变以及深静脉血栓形成患者活化血小板水平与正常人无显著差异。PTCA后24小时发展成急性血管闭塞或高度再狭窄的患者活化血小板CD62p、CD63增多，可以用于预测PTCA后急性缺血再发作的危险性。第47页,共54页，星期六，2024年，5月*微转移肿瘤细胞灵敏度:10-7第48页,共54页，星期六，2024年，5月*细胞周期分析:在细胞周期(G0，G1，S，G2，M)的各个时期，DNA的含量随各时相呈现出周期性的变化。通过核酸染料标记DNA，并由流式细胞仪进行分析，可以得到细胞各个时期的分布状态，计算出G0/G1%，S%及G2/M%。了解细胞的周期分布及细胞的增殖活性。也可利用细胞周期蛋白（CYCLIN）、Ki67、核增殖抗原（PCN