DB43T 2175-2021 辣椒远缘杂交胚拯救技术操作规程.docxVIP

ICS67.080.20CCSB31

43

湖南省地方标准

DB43/T2175—2021

辣椒远缘杂交胚拯救技术操作规程

TechnicalRegulationforembryorescueofDistantHybridinPepper

2021-08-29发布2021-10-29实施

湖南省市场监督管理局发布

DB43/T2175—2021

I

目次

前言 Ⅲ

1范围 1

2术语和定义 1

3试剂和设备 1

4胚拯救培养基制备 2

5胚拯救技术流程 2

附录A（资料性）辣椒胚拯救培养基配方 3

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III

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由湖南农业农村厅提出。

本文件由湖南省农业标准化技术委员会归口。

本文件主要起草单位：湖南农业大学、湖南省蔬菜研究所。

本文件主要起草人：杨博智、周书栋、郑井元、马艳青、戴雄泽、李雪峰、张竹青、陈文超、杨莎、梁成亮、李鑫、邹学校。

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1

辣椒远缘杂交胚拯救技术规程

1范围

本文件规定了辣椒远缘杂交胚拯救的术语和定义、试剂和设备、培养基制备、胚拯救技术流程等操作规程。

本文件适用于辣椒远缘杂交胚拯救。

2术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。2.1

远缘杂交

指不同种、属或亲缘关系更远的植物类型间进行的杂交。2.2

胚拯救

植物远缘杂交获得的合子胚常在发育早起阶段就败育或退化，无法收获杂交种子。胚拯救指采用组织培养技术，将合子胚转至适合的培养基中离体培养，使其能正常发育成完整植株的方式。

3试剂和设备

3.1试剂

所有试剂等级均为分析纯，见表1。

表1辣椒远缘杂交胚拯救技术所需试剂

试剂

名称

无机试剂

次氯酸钠、氢氧化钠、盐酸、硝酸铵、硝酸钾、氯化钙、七水硫酸镁、磷酸二氢钾、碘化钾、硼酸、四水硫酸锰、七水硫酸锌、钼酸钠、氯化钴、硫酸亚铁、EDTA二钠盐、

有机试剂

酒精、肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇、盐酸硫胺素、甘氨酸、叶酸、生物素

植物生长调节剂

萘乙酸、激动素、赤霉素、6-苄氨基腺嘌呤、吲哚-3-乙酸

其他

琼脂粉、蔗糖

3.2仪器设备

超纯水仪、电子分析天平（精确度：0.0001g）、pH计（或pH试纸）、刻度容量瓶（量程分别为100mL、500mL）、移液枪（量程分别为100μL、1mL、10mL）、低温冷藏冰箱（温度范围：0～10℃)、高压蒸汽灭菌锅

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2

4胚拯救培养基制备

4.1培养基类型

培养基包括胚拯救培养基和幼胚分化成苗培养基，其配方见附录A。

4.2消毒和灭菌

培养基配制好后，调pH值为5.8，置于高压蒸汽灭菌锅中121℃,1.05kg/cm2条件下灭菌15min。

5胚拯救技术流程

5.1授粉

收集父本花粉，选取母本植株上将开未开的花苞，去除雄蕊，对其进行人工授粉，授粉24h后用

75mg/L的2,4-D溶液涂抹母本植株上授粉花苞的花梗。

5.2幼胚培养

选用辣椒为授粉后18d获得的青果，流水下冲洗果实表面30s，在超净工作台中，用75％酒精棉球擦拭果实表面，用消毒后的解剖刀将果实竖切成两半，再用无菌镊子取出果实内未成熟种胚，接种至胚拯救培养基中，黑暗培养至胚根产生。培养温度为（28±1）℃。

5.3幼胚分化成苗

在超净工作台中，取出带胚根的辣椒胚，剥离种皮，接种于幼胚分化成苗培养基中培养至成苗。培养条件为光照阶段（28±1）℃,黑暗阶段（20±1）℃,光照时间16h/d，光照强度2000lx。

5.4炼苗与移栽

待再生苗长至（4～7）片真叶时，打开培养瓶瓶盖，置光照培养室中适应外界环境2d～3d后。将组培苗取出，洗净根部的培养基，移栽至基质中黑暗条件下炼苗，温度为（28±1）℃,湿度90％。炼苗5d后，将室内环境逐步调整到与辣椒苗在外界生长的环境相近，继续培养15d，移栽幼苗至室外。

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附录A

（资料性）

辣椒胚拯救培养基配方

培养基名称

配方成分

胚拯救培养基

825mg/L硝酸铵、950