基因工程的基本操作程序-图课件.pptVIP

**************基因工程的主要操作步骤选择目的基因确定需要表达的遗传特征,选择相应的目的基因。提取目的基因采用酶切、PCR等技术从原生物中分离提取目的基因。制备载体选择合适的质粒或病毒作为承载框架,准备重组表达。重组DNA利用限制性内切酶和连接酶将目的基因插入载体。导入宿主细胞将重组DNA转化进大肠杆菌或酵母等宿主细胞。筛选鉴定利用抗生素抗性、酶活性等方法筛选和验证转化株。扩增培养通过发酵培养大量扩增重组菌株,表达目的基因产品。选择目的基因确定目的基因基因工程首先需要选择将要克隆和表达的目的基因。这可以是来自细菌、动物或植物的任何有价值的基因。基因功能分析对目的基因的功能、表达调控机制等进行深入分析,为后续的基因操作提供依据。评估目的基因考虑目的基因的长度、结构、密码子偏好等特性,选择合适的克隆策略和表达系统。设计克隆引物根据目的基因序列设计特异性的引物,用于目的基因的扩增和克隆。提取目的基因1基因提取从细胞中分离出目的基因DNA片段2切割酶处理使用限制性内切酶切割目的基因DNA3纯化分离利用电泳等方法分离纯化目的基因DNA提取目的基因是基因工程的关键一步。首先需要从细胞中分离出目的基因的DNA片段,然后使用限制性内切酶对DNA进行切割以获得纯度更高的目的基因。最后通过电泳等方法将目的基因DNA从其他DNA片段中分离纯化。这些操作确保我们得到足够干净、可用于下一步重组的目的基因。制备载体1质粒作为载体质粒是细菌和古细菌常见的环状DNA分子,可以作为理想的基因工程载体。它们具有自主复制能力,易于操作且可以大量扩增。2载体的主要功能基因工程载体需要具备复制起始点、选择性标记基因和多克隆位点等功能,用于克隆目的基因并传递到宿主细胞中。3常用质粒载体常见的质粒载体包括pBR322、pUC系列、pET系列等,它们在大肠杆菌中广泛应用。此外,还有特殊用途的病毒载体。载体的主要功能1复制功能载体能够在宿主细胞中进行自主复制,确保目的基因能够持续表达。2选择功能载体通常携带抗生素抗性基因,可用于筛选成功接受重组DNA的宿主细胞。3表达功能载体含有强大的启动子,可以驱动目的基因在宿主细胞中高效表达。4易操作性载体通常设有多克隆位点,便于目的基因的插入和易于操作。常用的质粒作为载体质粒是细菌或古细菌等单细胞生物体内的一种环状DNA分子,可以作为常用的基因工程载体。质粒拥有自主复制的能力,并且能够在宿主细胞中稳定地存在和传代。常见的质粒有pUC、pBR322、pET等,这些质粒已经被广泛开发和应用于基因克隆、蛋白表达等领域。重组DNA1切割使用限制性内切酶切割目的基因和载体DNA2连接利用DNA连接酶将目的基因片段连接到载体上3转化将重组DNA导入宿主细胞以实现表达重组DNA的关键步骤包括:切割目的基因和载体DNA、利用DNA连接酶将其连接起来形成重组DNA分子、最后转化到宿主细胞中进行表达。这一过程需要精细的操作,确保遗传物质的正确组装和导入。重组DNA的方法限制性内切酶切割使用特异性识别和切割DNA序列的限制性内切酶,将目的基因和载体DNA切割成匹配的粘性末端。DNA连接酶连接利用DNA连接酶,将目的基因和载体DNA的粘性末端连接在一起,形成重组DNA分子。转化入宿主细胞将重组DNA导入大肠杆菌或酵母细胞等宿主细胞,使其表达目的基因。限制性内切酶的作用DNA切割限制性内切酶能够在DNA特定位点识别并切割DNA分子,为后续的重组DNA技术提供了基础。碱基识别不同的限制性内切酶能识别和切割不同的DNA序列,这种特异性识别是基因工程的关键所在。DNA分离利用限制性内切酶可将DNA片段分离,为下一步的克隆和测序等操作奠定基础。DNA连接酶的作用连接断开的DNA片段DNA连接酶能够识别和连接DNA分子上的断裂点,将两个DNA片段通过磷酸二酯键牢牢地连接起来。促进重组DNA形成在基因工程中,DNA连接酶起到关键作用,能够帮助将目的基因片段与载体DNA片段连接,从而得到重组DNA。确保重组DNA的稳定性连接酶形成的磷酸二酯键非常稳定,可以确保重组DNA的结构完整性,使其在宿主细胞内能够长期稳定存在。提高转化效率DNA连接酶的作用能够提高重组DNA导入宿主细胞的效率,增加成功转化的可能性。将重组DNA导入宿主细胞1选择宿主细胞大肠杆菌是最常见的宿主细胞2制备感受态细胞使细胞膜可以吸收外来DNA3转化方法如热休克法、电穿孔法、脂质体法等将重组DNA导入宿主细胞是基因工程的关键步骤之一。首先需要选择合适的宿主细胞,通常