棉花GhbHLH137基因克隆、表达分析及亚细胞定位.docxVIP

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2024-12-19 发布于广东
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棉花GhbHLH137基因克隆、表达分析及亚细胞定位.docx

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棉花GhbHLH137基因克隆、表达分析及亚细胞定位

一、内容描述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．2

1.1研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．2

1.2研究目的与内容．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3

二、材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

2.1实验材料．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5

2.1.1棉花品种与来源．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6

2.1.2基因克隆相关试剂．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7

2.1.3表达分析相关试剂．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9

2.1.4亚细胞定位相关试剂．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10

2.2实验方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11

2.2.1基因克隆．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12

2.2.2表达分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13

2.2.3亚细胞定位．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14

三、棉花GhbHLH137基因克隆．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15

3.1核酸提取．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．16

3.2基因序列分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17

3.3基因克隆载体选择与构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17

3.4克隆基因的筛选与鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19

四、棉花GhbHLH137基因表达分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20

4.1样品制备．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21

4.2表达载体构建与转化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22

4.3表达水平检测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23

五、棉花GhbHLH137基因亚细胞定位．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．24

5.1转化细胞株构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25

5.2显微镜观察．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26

5.2.1光学显微镜．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27

5.2.2荧光显微镜．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28

5.3亚细胞定位结果分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．29

六、结论与展望．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．29

6.1研究结论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30

6.2研究不足与展望．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31

一、内容描述

本研究旨在克隆棉花（Gossypiumhirsutum）GhbHLH137基因，并分析其表达模式以及亚细胞定位。通过设计特异性引物，我们成功地从棉花基因组中扩增出该基因的全长序列。随后，利用原核表达系统和真核表达载体，在大肠杆菌和烟草叶片细胞中进行了GhbHLH137基因的表达分析。结果显示，GhbHLH137基因在植物生长发育过程中具有重要的调节作用。为了进一步了解其在植物细胞中的亚细胞定位，我们采用了免疫荧光染色技术，将绿色荧光蛋白（GFP）融合到GhbHLH137基因的C末端，成功实现了GFP在植物细胞中的亚细胞定位。这些研究成果为揭示GhbHL