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细胞融合技术及相关进展

摘要：细胞工程是四大生物工程之一，在生物、医学等许多领域取得了开创性的研究成果。细胞融合方法得到不断更新，融合率也得到逐步提高。该技术在细胞遗传学、单克隆抗体及种质资源的开发利用等方面的研究具有重要意义。因此本文对细胞融合的定义机理、应用及融合技术方面的相关研究成果进行总结和阐述。

???????关键词：细胞融合；生物法；化学法；物理法

???????细胞融合技术是近30多年来迅速发展起来的一项新兴细胞工程技术，已在农业、畜牧业、医药等多领域取得研究成果，且应用领域不断扩大[1]。细胞融合不仅为细胞的起源、肌肉骨骼胎盘的发育、干细胞介导的组织再生等理论领域研究提供了有力手段，而且被广泛应用于育种学、发生生物学及免疫医学，特别是在动植物新品种的培育、单克隆抗体的制备以及抗癌疫苗的研发等方面具有重要意义。

???????1细胞融合的定义及机理

???????细胞融合也称细胞杂交，是在自然条件下或用人工方法使两个或两个以上的同源或异源细胞或原生质体相互接触，发生膜融合、胞质融合和核融合而形成杂种细胞的过程。

???????细胞融合与病毒和细胞之间的融合有许多相似之处，即带包被的病毒或细胞通过转膜病毒蛋白介导与宿主细胞的细胞膜进行融合，过程中伴随蛋白构象的变化。细胞融合主要经过以下几个主要步骤：原生质体或细胞相互靠近；质膜融合形成细胞桥；胞质渗透；细胞核融合。其中细胞桥的形成是细胞融合的关键一步，而只有细胞核发生了融合，多核细胞才能存活下去。

???????2细胞融合的方法

???????2.1生物法

???????病毒诱导细胞融合：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用而与宿主细胞膜直接融合。当其同时进入两个细胞时，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，打破两个细胞膜的隔阂，引起细胞质的交流，进而使细胞发生融合。

???????单纯疱疹病毒（HSV）：HSV介导细胞-细胞融合需要四种关键包膜蛋白gD，gB和异二聚体gH/gL，其介导细胞融合的过程如下：gD与细胞受体结合，导致其胞外域的C端部分发生构象变化，暴露出核心部位[2]；激活的gD与gH/gL相互作用并将其转化为正调控因子；正调控因子激活gB成为活性的融合因子[3]。最终将导致病毒和宿主细胞膜之间的融合，进而介导细胞-细胞融合。

???????流感病毒：流感病毒颗粒与宿主细胞表面的唾液酸结合后，通过内吞作用被内化；内含体膜中的蛋白质泵会降低含病毒体的隔室内的pH，而产生两种效果：由于质子可以通过M2离子通道进入病毒粒子内部，导致粒子内部pH降低，M1层分离，使膜更具延展性并有助于融合[4]；低pH诱导内含体中病毒糖蛋白血凝素的构象变化，导致病毒和细胞膜融合[5]，进而介导细胞-细胞融合。

???????信号通路介导法：研究发现MSCs和mESCs可以在共培养中自发形成融合衍生的杂合体，尽管效率较低。且Rho-Rock-actin/肌球蛋白途径不仅对MSC分化和ESC自我更新至关重要[6]，对ESC中的细胞融合也是重要的。相反，其抑制作用使MSC皮层张力减少，形成流动性更好的质膜，其促进MSC变形和ESC侵入[7]。研究已经证明不同类型的细胞，包括MSC，神经元细胞，内皮细胞和其他细胞可以通过隧道纳米管[8，9]交换囊泡和线粒体等胞质成分。

???????2.2化学法

???????化学法是指采用化学诱导剂改变细胞膜脂质分子排列诱导细胞融合的方法。

???????Janus粒子诱导融合：研究表明，包含氢化、氟化和混合氢化氟化JD的Janus树枝状聚合物的三组分体系通过膜水合以特定比例共组合成前所未有的超分子粒子，表示为Janus树枝状大分子。它们由哑铃形结构组成，由洋葱状氢化囊泡和洋葱状氟化囊泡系在一起。相同三组分体系的不同比例能产生各种结构，包括均匀的洋葱状囊泡、核-壳结构和完全自我分选的氢化和氟化囊泡[10]；其自分选途径可用于稳定氢化和氟化双层之间的界面。裂变样途径表明在生物系统中融合和裂变过程可能不需要蛋白质的参与，而是可以由膜组成比率的改变引起[11]。

???????缺氧诱导融合：研究发现缺氧促进口腔鳞癌细胞与人永生化口腔上皮细胞之间的自发性细胞融合。因为低氧可导致上皮-间质转化（EMT）[12]，其会改变上皮细胞表面的一些蛋白质，蛋白质的变化使上述两种细胞的融合率增加，而DAPT（EMT阻断剂）显著降低融合率[13]。

???????聚乙二醇（PEG）诱导融合：PEG促细胞融合的机制如下：PEG分子具有弱负极性，可以与具有正极性基团的水分子、蛋白质等形成氢键，在相邻的原生质体间起到分子桥的作用，使原生质体接触。当其被洗脱时，膜电荷发生紊乱而重新分配。此时，一种原生质体上带正电的