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Strep-TagII蛋白纯化磁珠(BeadsMagroseStrep-Tactin)
Strep-TagII蛋白纯化磁珠(BeadsMagroseStrep-Tactin)
货号:M2350
规格:5mL
保存:2-8℃,保质期2年
产品内容:
Strep-Tag系统是模拟链霉亲和素-生物素系统的新型蛋白纯化系
统,Strep-Tactin对Strep-TagII的亲和能力与链霉亲和素相比,至少
强10倍以上,且分离纯化条件温和,在生理条件下即可实现蛋白的分
离纯化;此外,与其他tag相比,Strep-TagII为8个氨基酸的小标签
(WSHPQFEK),由于标签小,仅为1kDa左右,不影响融合后蛋白
质的结构和功能。这些温和的纯化参数能保存蛋白质的生物活性,并
仅经一步提取即可产出超过99%的纯度。BeadsMagroseStrep-
Tactin磁珠采用特殊的蛋白偶联工艺,将Strep-Tactin蛋白共价偶联
到超顺磁性磁珠表面,制备了一种专为高效、快速分离纯化Strep-tag
II蛋白的一种新型功能化材料,实现并搭建了提取速度、提取量及纯度
兼得的蛋白纯化平台。
产品特性:
产品名称BeadsMagroseStrep-Tactin
磁珠粒径30~150μm
配基含量~6mgStrep-Tactin/mLGel
融合蛋白结合量1~7mgStrep-tagII蛋白/mLGel
悬液浓度10%(v/v)磁珠悬液
保存液1×PBS(0.1%Tween-20+0.05%NaN3)
Binding/WashingBuffer10mMTris-HCl,150mMNaCl,1mM
EDTA,pH8.0
ElutionBuffer2.5mMdesthiobiotininBindingBuffer
RegenerationBuffer0.5MNaOHor1mMHABAinBinding
Buffer
注意:磁珠蛋白结合量与目标蛋白特性相关,此处仅做参考值。
适用范围:
可用于从任何表达系统,包括杆状病毒、哺乳动物细胞、酵母和
细菌中含有Strep-TagII标签蛋白的分离纯化。
操作步骤:
目标蛋白与磁珠的结合性能将直接影响目标蛋白的纯化效率,各
种缓冲液配制也将在一定程度上影响目标蛋白的回收率和纯度。以下
提供一个较为广泛应用的Strep-TagII蛋白的纯化流程,用户可参考该
操作流程,或者根据自己蛋白的特性自行设计和优化蛋白纯化流程。
1、缓冲溶液配制
Binding/WashingBuffer:10mMTris-HCl,150mMNaCl,1mM
EDTA,pH:8.0
ElutionBuffer:2.5mMdesthiobiotininBindingBuffer。
2、样品处理
(1)大肠杆菌、酵母等细胞内表达蛋白:表达细胞用适量Binding
Buffer稀释,加入蛋白酶抑制剂(如
终浓度为1mM的PMSF);冰浴超声裂解细胞,即为粗蛋白样
品。如果样品过于粘稠,可根据需要在粗样品中加入适量核酸酶,在
冰上放置30min,以降解核酸。另外,如果目标蛋白含量较低,建议
将粗蛋白样品进行离心操作。
(2)胞外表达蛋白:取胞外表达上清,用等量BindingBuffer稀释
平衡,即为粗蛋白样品。
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