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per扩增试验报告
篇一:DNA提取及PCR扩增试验报告
PCR扩增及DNA琼脂糖凝胶电泳刘琳
1131428环境科学
—试验目的
1.学习并把握PCR扩增的根本原理与
试验技术。
2.对扩增后的DNA进展琼脂糖凝胶电
泳试验,并分析相应结果。
二、试验原理1.PCR扩增
多聚酶链反响[PCR)技术的原理类
似于DNA的自然复制过程。在微量离心管
中参加适量缓冲液,参加微量模板DNA、四
dNTP)Taq
种脱氧核甘酸〔、耐热聚合酶及
两个合成DNA的引物,而后加热使模板
DNA在高温下[94℃)变性,双链解链,这
是所谓变性阶段。降低溶液温度,使合成引
物在低温55℃〕温度进展剩余的循环。这使
(
得在较为严紧的条件下可以获得目的模板
的局部拷贝。
篇二:PCR试验报告一般生物学试验报
告
试验名称:用PCR扩增的方法鉴别不
同物种来源的肌肉一、特异性目的片段DNA
的扩增〔一)试验原理
聚合酶链式反响PolymeraseChain
(
Reaction,PCR)是体外酶促合成特异DNA
片段的一种方法,其根本原理为DNA的半
保存复制。PCR技术由①高温变性模板;
②引物与模板退火;③引物沿模板延长这3
步反响组成一个循环,通过屡次循环反
响,目的DNA得以快速扩增。其主要步骤
是:将模板DNA置于高温下(通常为
93℃-94℃),
使其变性解成单链;人工合成
的两个寡核甘酸引物在其适宜的复性温度
下分别与目的基因的两条单链互补结合;
热稳定DNA聚合酶T叫酶)在72℃将单
(
3,
核甘酸从引物的端开头掺入,以目的基
10
53’
由于模板按一的方向延长,合成互补
链。
本试验承受物种特异性引物扩增的方
法来鉴定3种不同物种来源的肌肉。以不同
物种来源的动物DNA为模板,用物种特异
性的引物进展PCR扩增,只有在模板和引
物的物种相对应的状况下才会有特异性条
带的消灭。应用此方法,可以特异性地检测
样品中痕量的特定DNA成分。
.
〔二)试验步骤不同反响体系的配制
按下表将各成分分别参加一做好标记
的无菌PCR管中,配制50(11的PCR反响体
系,留意酶要最终加,加完后将PCR管放置
在冰上。
1.将上述混合液稍加离心,约10s左右。
取下后马上置于PCR仪中,盖紧热盖,定好
PCR仪的反响程序,执行扩增程序。
反响程序为:
预变性94℃5min11
变性94℃5s退火50℃5s
延伸72℃20s后延长72℃5min
2.反响完毕后,终止程序,将PCR管取
4℃,30
出,放置于待电泳检测。循环
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