生物材料的预处理和液固分离.ppt

一细胞壁的结构革兰氏阳性菌的细胞壁主要由肽聚糖层（约20－80nm）组成革兰氏阴性菌肽聚糖层较薄，仅2－3nm，在肽聚糖层外还有两层外壁层。外壁层约8－10nm可见革兰氏阳性菌细胞壁较厚，较难破碎！第19页,共41页，星期六，2024年，5月霉菌的细胞壁较厚，约100－250nm酵母的细胞壁比革兰氏阳性菌的细胞壁厚，更难破碎第20页,共41页，星期六，2024年，5月机械法匀浆法珠磨法超声波化学法化学试剂处理酶解法制成丙酮粉物理法干燥冻融渗透压冲击二破碎方法第21页,共41页，星期六，2024年，5月机械法高压匀浆法：适用于酵母菌、大肠杆菌、巨大芽孢杆菌和黑曲霉等。不适用于高度分枝的微生物高速珠磨法：利用玻璃小珠与细胞悬液一起快速搅拌，由于研磨作用，使细胞破碎超声波破碎法：实验室常用影响因素：频率、液体温度和粘度、处理时间等第22页,共41页，星期六，2024年，5月FrenchPress压榨

压榨是一种温和的、彻底破碎细胞的方法。在1000×105Pa～2000×105Pa的高压下使几十毫升的细胞悬液通过一个小孔突然释放至常压，细胞将彻底破碎。这是一种较理想的破碎细胞的方法，但仪器费用较高第23页,共41页，星期六，2024年，5月超声波振荡器第24页,共41页，星期六，2024年，5月`^非机械法化学法：采用化学试剂处理细胞，溶解细胞或抽提细胞组分酶解法：利用酶（溶菌酶、蛋白酶、脂肪酶、核酸酶、透明质酸酶等）反应分解破坏细胞壁上特殊的键，以达破壁的目的需与其它方法配合使用（辐射、渗透压冲击、反复冻融法等）途径：在细胞悬液中加酶或采用自溶作用;自溶作用：利用微生物自身产生的酶来溶菌，而不需外加其它的酶自溶的方法：加热法、干燥法渗透压冲击法：先把细胞放在高渗溶液中，由于渗透压作用，细胞内水分向外渗出，细胞发生收缩，当达到平衡后，将介质快速稀释或将细胞转入水或缓冲液中，由于渗透压发生突然变化，胞外的水分迅速渗入胞内，使细胞快速膨胀而破裂冻融法：将细胞放在低温（-15℃），然后在室温中融化，反复多次，细胞壁破裂干燥法：经干燥后的菌体，其细胞膜的渗透性发生变化，同时部分菌体会产生自溶，然后用丙酮、丁醇或缓冲液等溶剂处理时，胞内物质就会被抽提出来方法：空气干燥、真空干燥、喷雾干燥和冷冻干燥化学法1用碱处理2用脂溶性有机溶剂3表面活性剂4制成丙酮粉碱处理：可以溶解除去细胞壁以外的大部分组分，酸碱还可以调节溶液的pH，改变细胞所处的环境，从而改变蛋白质的电荷性质，使蛋白质之间或蛋白与其他物质之间的作用力降低而易于溶解到液相中去，便于后面的提取脂溶性有机溶剂：如丁醇、丙酮等，它们能溶解细胞膜上的脂类化合物，使细胞结构破坏，而将胞内产物抽提出来表面活性剂：常能引起细胞溶解或使某些组分从细胞内渗漏出来制成丙酮粉：组织经丙酮脱水干燥制成丙酮粉，不仅可以减少酶的变性，同时因细胞结构成分的破碎使蛋白质与脂质结合的某些化学键打开，促使某些结合酶释放到溶液中第25页,共41页，星期六，2024年，5月细胞破碎率定义为被破碎细胞的数量占原始细胞数量的百分比数，即：??????????Y(%)=[(N0-N)/N0]×100N0－原始细胞数量N－经t时间操作后保留下来的未损害完整细胞数量三破碎率的评价目前N0和N主要通过下面的方法获得：直接计数法在血球计数板用显微镜观察，直接对适当稀释后的样品进行计数间接计数