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实验一、实验二
基因的PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳检测
1、实验目的
本实验通过学习用PCR扩增技术来获取特异性的基因DNA,以与扩增DNA的琼脂糖凝胶
电泳检测技术,掌握有关的技术原理和实验方法.
2、实验原理
2.1特异性基因的PCR扩增：
PCR扩增是指直接以待扩增的DNA为模板,加入特异性的一对引物、四种脱氧核糖核苷
酸以与TagDNA聚合酶等,进行DNA的合成反应.
2.2琼脂糖电泳：
DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电,在电场中向阳极移动.在一定的电场强度
下,DNA分子的迁移速度取决于分子本身的大小和构型.DNA分子的迁移速度与其相对分子量
成反比.
琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的最佳分辨范围
琼脂糖凝胶浓度线形DNA的最佳分辨范围〔bp〕
0.5%1,000～30,000
0.7%800～12,000
1.0%500～10,000
1.2%400～7,000
1.5%200～3,000
3、材料、试剂与器具
3.1材料
DNA模板
3.2试剂
4XdNTP,Taq酶buffer,一对引物,TaqDNA聚合酶,琼脂糖,0.5*TBE.
3.3器具
1/5
PCR管,移液器,1.5mlEppendorf管,PCR管架,Eppendorf管架,PCR仪,
电泳仪；紫外检测仪；水平电泳槽；一次性手套.
4、操作步骤
4.1特定基因DNA的扩增
1)配模板DNA液
HO15.3μl
2
dNTP10mM0.5μl
10×TaqBuffer2μl
引物110μM0.5μl
μl
引物210μM0.5
Template1ul
TaqDNApolymerase0.2μl
==========================
Total20μl
2)加入1ul的模板DNA.对照组的模板为ddHO.
2
3)进行PCR反应.按照下列反应条件进行：
预变性：95℃5min
变性：95℃？s
退火反应：〔Tm-5〕℃？s
引物延伸：72℃1kb/min,
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