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2型及非2型支气管哮喘患者呼吸道共生微生物网络
的作用特征
【摘要】目的研究2型及非2型支气管哮喘(简称哮喘)患者呼吸道共生微生
物网络的作用特征。方法基于哮喘患者队列的前瞻性研究。采集2021年5月
至2022年5月,首都医科大学附属北京朝阳医院呼吸与危重症学科收治的55
例哮喘患者[男25例,女30例,中位年龄47.7岁(年龄范围34.3~63.0岁)]
及来自首都医科大学附属北京朝阳医院体检中心的12名健康对照者的呼吸道诱
导痰样本;根据呼出气一氧化氮(FeNO)水平,将哮喘患者分为高FeNO组22
例(FeNO≥40ppb,即2型哮喘组)、低FeNO组33例(FeNO40ppb,即非2型
哮喘组)。对所有呼吸道诱导痰样本进行宏基因组二代测序并进行微生物群落多
样性、组成特征、共生网络特征和代谢功能预测等生物信息学分析。采用Krusk
al-Wallis秩和检验进行组间比较,采用线性判别分析(LEfSe)方法比较各组
间的菌群组成差异。R语言用于微生物网络分析。此外,还采用PICRUSt预测微
生物群落的代谢功能特征。结果健康对照组微生物群落中,厚壁菌门和变形菌
门的占比(分别为29%和21%)均少于哮喘组患者(低FeNO组分别占37%和33%,
高FeNO组分别占42%和26%)。低FeNO组的微生物网络有64对边,形成了16
个群落;约75%的节点特征向量中心度的数值在0~0.05,25%的节点的特征向量
中心度的数值在0.10~0.45;κ-核分解有4层,大约42%的顶点在中心的2层。
高FeNO组的微生物网络有80对边,形成了18个群落;81%的节点特征向量中心
度的数值在0~0.05,19%的节点的特征向量中心度的数值在0.10~0.35;κ-核
分解有8层,21%的顶点位于中心的2层。低FeNO组和高FeNO组的主要功能差
异表现在代谢途径(包括糖类、脂类、氨基酸和能量代谢)、抗药性、生物膜传
输、信号传导、胞间通讯、细胞修复中。结论与非2型哮喘患者相比,2型哮
喘患者的呼吸道微生物菌群的α-多样性更高,变形菌门的微生物含量更低,微
生物网络更为聚集;两种内型哮喘患者的代谢功能预测结果有显著差异。
【关键词】哮喘;微生物组;内型;网络
支气管哮喘(简称哮喘)是一种慢性气道疾病。根据是否存在2型炎症,哮
喘可分为2型哮喘和非2型哮喘,2型哮喘以高呼出气一氧化氮(FeNO)、高嗜
酸性粒细胞计数为特征[1-2]。这两种内型对糖皮质激素的治疗反应差别非常
明显,其呼吸道微生态的特征可能是原因之一[3]。随着宏基因组二代测序以
及生物信息学的发展,两种类型患者呼吸道的不同微生态特征及其与炎症类型的
关联得以被揭示[4-10]。比如2型哮喘患者的呼吸道菌群中含有更高比例的
放线菌门,且其含量与嗜酸性粒细胞计数明显正相关[11-12]。
除了菌群组成不同,呼吸道菌群之间彼此的相互作用也和哮喘的症状和炎症
类型有关,其微生物共生网络的特征对于代谢和病理过程非常重要[13-15]。
本研究的目的是探讨2型和非2型哮喘患者呼吸道共生微生物网络的特征差异。
对象与方法
一、研究对象
基于哮喘患者队列的前瞻性研究。本研究纳入2021年5月至2022年5月,
首都医科大学附属北京朝阳医院呼吸与危重症学科收治的55例哮喘患者及北京
朝阳医院体检中心体检的12名健康对照者,收集其呼吸道诱导痰样本。
哮喘患者纳入标准:(1)符合2024版《全球哮喘管理和预防策略》[16]
中哮喘的诊断标准;(2)患者本人完全理解并同意本临床医疗研究的目的和实
施,能配合医师完成诱导痰的采集。排除标准:(1)接受免疫抑制剂或长期类
固醇激素治疗的恶性肿瘤、慢性自身免疫性疾病患者;(2)心肝脑肾等重要脏
器严重受损者;(3)严重精神疾病患者;(4)妊娠或哺乳期患者。本研究已经
过首都医科大学附属北京朝阳医院伦理委员审查会批准[(2020)425号],参
与本研究的哮喘患者及健康对照者均签署知情同意书。
根据FeNO水平,再将纳入的55例哮喘患者再分为高FeNO组22例(FeNO
≥40ppb[17‑18],即2型哮喘组)和低FeNO组33例(FeNO40ppb,即非2
型哮喘组)。
二、诱导痰采集和肺功能的测定
诱导痰采集步骤按照指南相关内容进行[19-2
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