TGXAS-玉米品种DNA指纹鉴定技术规程SSR标记法.docxVIP

Q/LB.□XXXXX-XXXX

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ICS

FORMTEXT65.020.20

CCS

FORMTEXTB04

T/GXAS

FORMTEXT团体标准

T/FORMTEXTGXASFORMTEXTXXXXX—FORMTEXTXXXX

FORMTEXT

FORMTEXT玉米品种DNA指纹鉴定技术规程SSR标记法

FORMTEXTProtocolfortheDNAfingerprintidentificationof

maizevarieties-SSRmarkmethod

FORMDROPDOWN

FORMTEXT2021-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX发布

FORMTEXT2021-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX实施

FORMTEXT广西标准化协会??发布

STYLEREF标准文件_文件编号T/GXASXXXXX—XXXX

T/GXASXXXXX—XXXX

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目次

TOC\o1-1\h\t标准文件_一级条标题,2,标准文件_附录一级条标题,2,前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4原理 1

5仪器设备及试剂 1

6溶液配制 1

7引物信息 2

8操作步骤 2

9数据记录与统计 4

10判定规则 4

附录A（规范性）主要仪器设备及试剂 6

附录B（规范性）溶液配制 8

附录C（规范性）核心引物名单及序列 10

附录D（规范性）数据统计记录表 12

参考文献 14

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前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由广西壮族自治区农业科学院玉米研究所提出。

本文件起草单位：广西壮族自治区农业科学院玉米研究所、广西青青农业科技有限公司、广西兆和种业有限公司、广西恒茂种业有限公司、广西博士园种业有限公司、广西桂先种业有限公司、广西万川种业有限公司、南宁市桂福园农业有限公司、广西皓凯生物科技有限公司。

本文件主要起草人：。

STYLEREF标准文件_文件编号T/GXASXXXXX—XXXX

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玉米品种DNA指纹鉴定技术规程SSR标记法

范围

本文件确立了玉米品种DNA指纹鉴定技术，规定了仪器设备及试剂、溶液配制、引物信息、参照品种、操作步骤、等阶段的操作指示，以及上述阶段之间的转换条件，描述了SSR标记法数据记录与统计、判定规则等追溯方法。

本文件适用于玉米自交系和单交种的SSR指纹数据采集及品种鉴定，其他杂交种类型及群体和开放授粉品种可参照执行。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

核心引物coreprimer

品种DNA指纹鉴定中优先选用的一套SSR引物，具有多态性高、稳定性好、重复性好等综合特性。

[来源：DB45/T1311－2016，3.1]

原理

由于不同玉米品种遗传组成不同，基因组DNA中简单重复序列的重复次数存在差异，这种差异可通过PCR扩增及电泳方法进行检测，从而能够区分不同玉米品种。

仪器设备及试剂

见附录A。

溶液配制

见附录B。

引物信息

核心引物名单及序列见附录C。

操作步骤

样品制备

随机抽取种子、幼苗、叶片等至少20个个体组成的混合样品进行分析或直接对至少5个个体单独进行分析。

DNA提取

CTAB提取法

取幼芽或叶片200mg～300mg充分研磨，或取种子充分磨碎，移入2.0mL离心管；每管加入600μL65℃预热的CTAB提取液，混合均匀，65℃保温30min，期间颠倒混匀；每管加入等体积的三氯甲烷/异戊醇混合液，充分混合后，静置10min；12000g离心5min后，吸取上清液至一新1.